白藜芦醇对肿瘤自杀基因系统的增效作用

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。J．—}学位论文作者签名壑鱼日期：加f晦易月牛日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允

2、许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名盘!舀论文导师签名日期：’勿f斗年b月牛日摘要目的本课题研究将对已确定对自杀基因系统具有协同增效作用的白藜芦醇这一中药活性成份进行研究，探究其如何通过缝隙连接细胞通讯增强自杀基因的旁杀伤效应，为建立中医药治疗肿瘤，推进抗癌中药新药和肿瘤基因治疗的临床应用打下基础。方法本实验以体外培养的大鼠肝癌细胞CBRH7919，

3、CBRH7919TK，小鼠恶性黑色素瘤B16一RFP，B16／TK-GFP作为研究对象。大鼠肝癌自杀基因系统运用MTT法检测白藜芦醇对其的增效作用，确定作用时间及药物浓度；WestemBlot检测白藜芦醇对缝隙连接蛋白，其中包括Cx26、Cx32和Cx43表达的影响；用裸小鼠体内实验验证白藜芦醇对大鼠肝癌自杀基因系统的增效作用。小鼠恶性黑色素瘤自杀基因(带绿色荧光)细胞运用MTT法检测白藜芦醇对其的协同增效作用，确定作用时间及药物浓度；流式细胞仪技术检测白藜芦醇对其凋亡作用影响；WesternBlot法

4、检测白藜芦醇对缝隙连接蛋白，其中包括Cx26、Cx32和Cx43表达的影响；成果一、白藜芦醇对小鼠恶性黑色素瘤自杀基因系统的增效作用(一)白藜芦醇对30％B16tk-GFP／GCV的增效作用用41unol／L、8p,moFL、161unol／L、321amol／L的白藜芦醇作用30％B16／TK-GFP细胞72h后，其细胞抑制率分别为．3．43+3．03％，．1．88+1．29％、26．65+1．87％、36．95+3．23％；41amol／L、81amol／L、161xmol／L、32I-tmol／L

5、的白藜芦醇联合作用30％B16TK．GFP／GCV细胞72h后，其细胞抑制率分别为43．32+3．93％、47．00+4．13％、53．74+4．61％、55．76士3．83％，金氏Q值分别是1．98、2．04、1．21、1．06，除了321xmol／L与30％B16TK．GFP／GCV联合属于相加效应之外，其他浓度均为协同效应。(--)用流式细胞仪检测白藜芦醇对30％B16厂rK-GFP的凋亡作用白藜芦醇单药作用于30％B1卵K．GFP时，亚倍体凋亡峰Sub．G1峰由细胞对照的3．00％增加到4．15

6、％，5．26％，6．96％，白藜芦醇16pxnol／L时与对照组相比，P<0．05，有显著性差异。联合GCV后，亚倍体凋亡峰即Sub．G1峰由单独GCV作用的6．63％增加到8．96％，11．32％，15．24％，白藜芦醇8“mol／L，16肛moFL时与GCV组相比，P<0．01，有显著性差异，与对应浓度的Res组相比P<0．01，有显著性差异。计算金氏Q值后，Q值都大于1．15，具有协同作用。可以看出，白藜芦醇与GCV联合作用于自杀基因时，其具有一定的协同作用。(三)WesternBlot检测白藜芦

7、醇对B16．RFP细胞株中Cx26、Cx32和Cx43缝隙蛋白表达的影响白藜芦醇作用B16．RFP细胞48h后检测Cx26蛋白有升高的趋势；Cx32蛋白表达统计无显著性差异；Cx43蛋白升高的趋势。二、白藜芦醇对大鼠肝癌自杀基因系统的增效作用(一)白藜芦醇对20％CBRH7919TK／GCV的增效作用用2．51amol／L、5vmol／L、10}tmol／L、20}tmol／L、40I．tmol／L的白藜芦醇作用20％CBRH7919tk细胞48h后，其细胞抑制率分别为．0．43+1．77％，．0．85

8、+0．58％、0．64+1．00％、9．75+1．45％、12．63+2．17％：2．5}tmol／L、5lmaol／L、lOlxmol／L、209tmol／L、401amol／L的白藜芦醇联合作用20％CBIm7919TK／GCV细胞48h后，其细胞抑制率分别为13．43士1．66％、14．02+1．92％、19．40+3．61％、24．15+2．84％、21．37+2．69％，金氏Q值分别是1．31、1．56、1．87、1．29、1．0