多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究

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1、多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究：戴学海，王华钧，金法祥，陈秋美【摘要】目的：了解多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法：自2006年1月至2006年10月住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药肺炎克雷伯菌，微量肉汤稀释法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测15种氨基糖苷类修饰酶基因。结果：20株多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、奈替米星及阿米卡星耐药率分别为75%、80%、65%和60%，其中氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性15株，aac(6’)-Ⅰb基因阳性1株，ant

2、(3”)-Ⅰ基因阳性16株，aph(3’)-Ⅰ基因阳性3株，ant(2”)-Ⅰ基因阳性1株。结论：多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ib、ant(3”)-Ⅰ、aph(3’)-Ⅰ和ant(2”)-Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;从肺炎克雷伯菌中检出aac(6’)-Ib-Cr型和aph(3’)-Ⅰ均为国内首次。【关键词】肺炎克雷伯菌;氨基糖苷类修饰酶;多重耐药性　　Abstract:Objective:Tounderstandtheexistenceofgenesencodingaminogl

3、ycosidemodifyingenzymeinmulti-resistantKlebsiellapneumoniae.Methods:Samplesof20strainsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaecollectedfromthepatientsfromJanuary2006toOctober2006eansofbrothinductioninoglycosidemodifyingenzymebyerasechainreactionulti-resistantKlebsiellapneumonia

4、etoaminoglycoside，suchasgentamicin，tobramycin，ilmicinandamikacininoglycosidemodifyingenzymeaac(3’)-Ⅱgenepositive，1strainofaac(6’)-Ib，16onesofant(3”)-Ⅰ，3onesofaph(3’)-Ⅰand1strainofant(2”)etime.Conculsion:Themainreasonsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaeresistancetoaminoglyc

5、osidearethepresenceofaminoglycosidemodifyingenzymescalledaac(3)-Ⅱ，aac(6”)-Ib，ant(3”)-Ⅰ，aph(3’)-Ⅰandant(2”)-Ⅰgenes.Genesofaac(6’)-Ib-Crandaph(3’)-ⅠinKlebsiellapneumoniaearebothfirstfoundandreportedinChina.　　Keyoniae;aminoglycosidemodifyingenzyme;multidrugresistance　　肺炎克雷伯菌(K.

6、pneumoniae，KPN)已是医院感染的重要病原菌。近年尽管国内已有KPN菌的氨基糖苷类药物部分耐药相关基因研究报道[1-2]，但报道所涉及耐药相关基因较少。我们曾报道了一组老年患者KPN菌分离株β-内酰胺酶基因分型研究[3]，为进一步了解我院多重耐药KPN菌氨基糖苷类药物各种耐药相关基因存在状况，我们对20株分离自老年病房产β-内酰胺酶的KPN菌进行了15种氨基糖苷类修饰酶基因检测，现报告如下。　　1材料和方法　　1.1菌株及鉴定20株均为分离自2006年1月-2006年10月间我院老年病房患者(年龄61～90岁)临床标本，分别为：痰液1

7、3份，尿液6份，胆汁1份。全部菌株均使用ATB细菌鉴定仪鉴定菌种。　　1.2抗菌药物敏感性试验药敏试验按美国CLSI2006年版要求。质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临床检验中心，抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法。　　1.3细菌处理挑纯培养菌落置入0.5mL离心管内(内预置200ng/mL蛋白酶K溶液200μL)，56℃水浴2h，改95℃水浴10min，离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液，-20℃冰箱保存备用。　　1.4基因PCR检测

8、15种氨基糖苷类修饰酶基因检测均为PCR法，靶基因引物序列和目的产物长度见表1。各种靶基因PCR扩增体系均为:每反应体系P1引物1μL(1.0μmmo