多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究

多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究

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1、多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究:戴学海,王华钧,金法祥,陈秋美【摘要】目的:了解多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法:自2006年1月至2006年10月住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药肺炎克雷伯菌,微量肉汤稀释法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测15种氨基糖苷类修饰酶基因。结果:20株多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、奈替米星及阿米卡星耐药率分别为75%、80%、65%和60%,其中氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性15株,aac(6’)-Ⅰb基因阳性1株,ant

2、(3”)-Ⅰ基因阳性16株,aph(3’)-Ⅰ基因阳性3株,ant(2”)-Ⅰ基因阳性1株。结论:多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ib、ant(3”)-Ⅰ、aph(3’)-Ⅰ和ant(2”)-Ⅰ等5种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;从肺炎克雷伯菌中检出aac(6’)-Ib-Cr型和aph(3’)-Ⅰ均为国内首次。【关键词】肺炎克雷伯菌;氨基糖苷类修饰酶;多重耐药性  Abstract:Objective:Tounderstandtheexistenceofgenesencodingaminogl

3、ycosidemodifyingenzymeinmulti-resistantKlebsiellapneumoniae.Methods:Samplesof20strainsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaecollectedfromthepatientsfromJanuary2006toOctober2006eansofbrothinductioninoglycosidemodifyingenzymebyerasechainreactionulti-resistantKlebsiellapneumonia

4、etoaminoglycoside,suchasgentamicin,tobramycin,ilmicinandamikacininoglycosidemodifyingenzymeaac(3’)-Ⅱgenepositive,1strainofaac(6’)-Ib,16onesofant(3”)-Ⅰ,3onesofaph(3’)-Ⅰand1strainofant(2”)etime.Conculsion:Themainreasonsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaeresistancetoaminoglyc

5、osidearethepresenceofaminoglycosidemodifyingenzymescalledaac(3)-Ⅱ,aac(6”)-Ib,ant(3”)-Ⅰ,aph(3’)-Ⅰandant(2”)-Ⅰgenes.Genesofaac(6’)-Ib-Crandaph(3’)-ⅠinKlebsiellapneumoniaearebothfirstfoundandreportedinChina.  Keyoniae;aminoglycosidemodifyingenzyme;multidrugresistance  肺炎克雷伯菌(K.

6、pneumoniae,KPN)已是医院感染的重要病原菌。近年尽管国内已有KPN菌的氨基糖苷类药物部分耐药相关基因研究报道[1-2],但报道所涉及耐药相关基因较少。我们曾报道了一组老年患者KPN菌分离株β-内酰胺酶基因分型研究[3],为进一步了解我院多重耐药KPN菌氨基糖苷类药物各种耐药相关基因存在状况,我们对20株分离自老年病房产β-内酰胺酶的KPN菌进行了15种氨基糖苷类修饰酶基因检测,现报告如下。  1材料和方法  1.1菌株及鉴定20株均为分离自2006年1月-2006年10月间我院老年病房患者(年龄61~90岁)临床标本,分别为:痰液1

7、3份,尿液6份,胆汁1份。全部菌株均使用ATB细菌鉴定仪鉴定菌种。  1.2抗菌药物敏感性试验药敏试验按美国CLSI2006年版要求。质控菌株:大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临床检验中心,抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法。  1.3细菌处理挑纯培养菌落置入0.5mL离心管内(内预置200ng/mL蛋白酶K溶液200μL),56℃水浴2h,改95℃水浴10min,离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液,-20℃冰箱保存备用。  1.4基因PCR检测

8、15种氨基糖苷类修饰酶基因检测均为PCR法,靶基因引物序列和目的产物长度见表1。各种靶基因PCR扩增体系均为:每反应体系P1引物1μL(1.0μmmo

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