多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究论文

《多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类药物耐药相关基因研究论文戴学海，王华钧，金法祥，陈秋美【摘要】目的：了解多重耐药肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法：自2006年1月至2006年10月住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药肺炎克雷伯菌，微量肉汤稀释法检测20种抗菌药物的敏感性;PCR法检测15种氨基糖苷类修饰酶基因。结果：20株多重耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、奈替米星及阿米卡星耐药率分别为75%、80%、65%和60%，其中氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性15株，aac(6’)-Ⅰb基因阳性1株，ant(

2、3”)-Ⅰ基因阳性16株.freelinoglycosidemodifyingenzymeinmulti-resistantKlebsiellapneumoniae.Methods:Samplesof20strainsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaecollectedfromthepatientsfromJanuary2006toOctober2006eansofbrothinductioninoglycosidemodifyingenzymebyerasechainreactionulti-resista

3、ntKlebsiellapneumoniaetoaminoglycoside，suchasgentamicin，tobramycin，ilmicinandamikacininoglycosidemodifyingenzymeaac(3’)-Ⅱgenepositive，1strainofaac(6’)-Ib，16onesofant(3”)-Ⅰ，3onesofaph(3’)-Ⅰand1strainofant(2”)etime.Conculsion:Themainreasonsofmulti-resistantKlebsiellapneumoniaere

4、sistancetoaminoglycosidearethepresenceofaminoglycosidemodifyingenzymescalledaac(3)-Ⅱ，aac(6”)-Ib，ant(3”)-Ⅰ，aph(3’)-Ⅰandant(2”)-Ⅰgenes.Genesofaac(6’)-Ib-Crandaph(3’)-ⅠinKlebsiellapneumoniaearebothfirstfoundandreportedinChina.Keyoniae;aminoglycosidemodifyingenzyme;multidrugresist

5、ance肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae，KPN)已是医院感染的重要病原菌。近年尽管国内已有KPN菌的氨基糖苷类药物部分耐药相关基因研究报道1-2，但报道所涉及耐药相关基因较少。我们曾报道了一组老年患者KPN菌分离株β-内酰胺酶基因分型研究3，为进一步了解我院多重耐药KPN菌氨基糖苷类药物各种耐药相关基因存在状况，我们对20株分离自老年病房产β-内酰胺酶的KPN菌进行了15种氨基糖苷类修饰酶基因检测，现报告如下。1材料和方法1.1菌株来源及鉴定20株均为分离自2006年1月-2006年10月间我院老年病房患者(年龄61～90岁)临床标本，分别

6、为：痰液13份，尿液6份，胆汁1份。全部菌株均使用ATB细菌鉴定仪鉴定菌种。1.2抗菌药物敏感性试验药敏试验按美国CLSI2006年版要求。质控菌株：大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临床检验中心，抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法。1.3细菌处理挑纯培养菌落置入0.5mL离心管内(内预置200ng/mL蛋白酶K溶液200μL)，56℃水浴2h，改95℃水浴10min，离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液，-20℃冰箱保存备用。1.4基因PCR检测15种

7、氨基糖苷类修饰酶基因检测均为PCR法，靶基因引物序列和目的产物长度见表1。各种靶基因PCR扩增体系均为:每反应体系P1引物1μL(1.0μmmol/L)、P2引物1μL(1.0μmmol/L)，dNTPs2μL(2mmol/L)，10倍缓冲液2μL(KCl10mmol/L，(NH4)2SO48mmol/L，MgCl22mmol/L，Tris-HCl(pH9.0)10mmol/L，NP400.5%，BSA0.02%(in，然后93℃30s→55℃30s→72℃60s，循环35周期，最后一个72℃延长至5min。PCR产物长度500bp者PCR扩增热循

8、环参数为：93℃预变性2min，然后93℃60s→55℃60s→72℃60s，循环35周期，最后一个72℃延长至5min。