肺炎克雷伯菌的耐药基因序

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1、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析摘要：目的研究大庆地区产超广谱β-内酰胺（extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型分布及序列变化。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增对分离14株耐药性强的产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株的TEM型、SHV型、CTX-M1型、CTX-M2型、CTX-M8型、CTX-M9型、OXA型ESBLS基因，1%琼脂糖凝胶电泳，回收DNA片段，测序分析各基因型在耐药的产超光谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株中的分布。结果TEM-1、SHV-1、CTX-M-1

2、基因扩增阳性数分别为4、4、7、4、2。结论分离的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌存在多个耐药基因。关键词：超广谱β-内酰胺酶；肺炎克雷伯菌；耐药性；基因型SequencinganalysisofdrugresistancegeneofESBL-producingKlebsiellapneumoniaeAbstract：ObjectiveToinvestigatethegeneticdistibutionofextended-spectrumβ-lactamases-(ESBLs)producingKlebsiellapneumoniaeinD

3、aqingCity.MethodsThegenotypesofTEM,SHV,CTX-M-1ESBLsgeneofESBL-producingKlebsiellapneumoniaeisolatedfrominpatientsinDaqingoilfieldgeneralhospitalwereamplifiedbyusingPCRandtheDNAfragmentswererecoveredafterelectrophoresiswith1%aglucosegel.Thenseqquenceanalysiswasconductedfori

4、nvestigatingthedistributionofdrugresistantgeneticstrainsofKlebsiellapneumoniae.ResultsThepositiveratesofgenotypesofTEM,SHV,CTX-M-1ESBLsgenewere58.0%,90.3%,16.1%,respectively.ConclusionThereareseveraldrugresistantgenotypesintheisolatedESBLs–producingKlebsiellapneumoniae.Key

5、words:ESBLs；Klebsiellapneumoniae；Drugresistance；Genotype超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）主要分布于医院环境中，其基因多编码于可移动的质粒中，并由质粒介导的能赋予细菌对青霉素类、头孢菌素类、单环B2内酰胺类药物耐药的一类酶,产ESBLs的细菌有较高的交叉耐药和多重耐药性特点[1]。ESBLs的编码基因可随质粒在同种或不同种革兰氏阴性细菌间传递，对临床就诊和住院病例构成危害。迄今为止已发现ESBLs200多种，主要为TEM型，SHV型，CTX-M型和OXA型，PER、VEB、GES、BES

6、等少见类型也在增加[2]。TEM及SHV型ESBLs通常编码TEM-1和TEM-2和SHV-1的结构基因突变，导致酶活性中心附近的氨基酸残基被其他氨基酸或衍生物取代。由于各地区使用抗菌素种类及剂量不尽相同，因此对本地区产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌基因型开展研究，及时准确检ESBLs，对防止ESBLs流行、控制医院内感染和指导临床治疗有着非常重要的意义。为此，我们对大庆油田总医院2009年分离的16株耐药性强的产ESBLs肺炎克雷伯菌的基因型进行研究。1材料与方法1.1菌株的来源2009年1月~2009年12月大庆油田总医院住院患者痰、

7、尿、血液、胸腹腔积液和各种创面分泌物中分离耐药性强的产ESBLs肺炎克雷伯菌14株。1.2试剂及仪器DNA分子量Marker（DL2,000TMDNAmarker）、dNTP、TaqDNA聚合酶、PCR离心管购自TaKaRa公司；Tris,琼脂糖（BBI公司）；PCR扩增仪（BIO-RADC1000TMThermocycler）；凝胶成像系统（美国Kodak公司Dolphin-DOC）,台式高速低温离心机（Eppendorf公司）；电泳仪和电泳槽（BIO-RAD）PH仪（sartoriusBasicphMeterPB-10）。1.2.1细菌

8、鉴定和药敏试验　采用VITEK-Ⅱ全自动微生物分析鉴定系统,鉴定卡:GN;药敏测试卡:GN09。质控菌株:大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603和铜绿假单