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《成人骨髓间充质干细胞对脐血cd34+细胞的体外扩增作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、成人骨髓间充质干细胞对脐血CD34+细胞的体外扩增作用：贾明峰,侯相麟,赵丽,刘蓓,李娟,陈轩【关键词】骨髓细胞 【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofadultbonemarroesenchymalstemcellsontheexpansionofumbilicalcordbloodCD34+cellsexvivo.METHODS:AdultbonemarroesenchymalstemcellsbilicalcordbloodCD34+cellsesenchymalstemcells,stemcellfactor,Interleukin11a
2、ndgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor,respectively.Attheendof3berofnucleatedcells,colonyformingcellsandCD34+cellsfor3esenchymalstemcellsandcytokinescoculturesystemssignificantlyenhancedtheexpansionofthecordbloodcellsberofnucleatedcellsby114.2±2.4fold,colonyformingcellsby40.5±8.6foldandCD
3、34+cellsby11.3±0.4fold,respectively.CONCLUSION:TheexpansionofumbilicalcordbloodCD34+cellscanbeenhancedexvivobyadultbonemarroesenchymalstemcellsbinedplification;CD34+cell;cordblood;bonecells;stemcells 【摘要】目的：探讨骨髓间充质干细胞(MSCS)对脐血CD34+细胞体外扩增作用.方法：分离培养成人MSCS作为滋养层，联合SCF,IL11和GMCSF分别组成对脐血CD34+细胞的不同扩增体系
4、，培养3esenchymalstemcells,MSCs）作为骨髓造血微环境中的一种重要细胞成分,近年来成为干细胞研究领域的一大热点.MSCs具有自我更新和多向分化潜能，在体外可被诱导分化为多种结缔组织及部分于外胚层的组织，形成骨、软骨、骨骼肌、腱、韧带、真皮、脂肪、骨髓基质和神经［1,2］.此外，还分泌多种生长因子支持骨髓造血，藉此MSCs可在体外作为滋养细胞层进行造血干/祖细胞扩增.自脐血（umbilicalcordblood,UCB）中发现造血干细胞(hematopoieticstemcell,HSC)以来，脐血HSC移植用于治疗恶性及非恶性血液病日益广泛，但单份脐血所含的造血细胞
5、不足以满足成人的移植所需，大量扩增后才能用于移植.鉴于此，我们探讨了来自成人的MSCS对脐血CD34+细胞的体外扩增作用. 1材料和方法 1.1材料 正常成年男性献骨髓者2例，健康足月分娩儿脐血14例,取自兰州市慈和堂医院和本院妇产科.Percoll分离液（密度1.073kg/L),淋巴细胞分离液（密度1.077kg/L）,马血清（HS）均购自TBD公司；DMEMLG培养基购自PAALab(Germany)；IMDM购自Gibco公司;胎牛血清(FBS)为杭州四季青公司产品;BSA、甲基纤维素、β巯基乙醇及L谷氨酰胺购自Sigma公司；重组人干细胞因子（rhSCF），重组人白细胞介
6、素11（rhIL11）,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGMCSF），重组人粒细胞集落刺激因子（rhGCSF）,重组人红细胞生成素（rhEPO）均购自Peprotech公司；荧光标记的抗CD34单克隆抗体（CD34PE）购自CoulterImmunotech公司；抗CD29,CD44,CD45和抗HLADR单克隆抗体购自PharMingen公司. 1.2方法 1.2.1MSCs的分离纯化及培养MSCs的分离纯化及培养按文献［3］介绍的方法进行.收集正常肝素抗凝骨髓约10mL，用Percoll溶液梯度离心,900g30min,收集中间相为有核细胞,然后将细胞按2×108/L密度接
7、种于DMEMLG培养基(含100mL/LFBS,L谷氨酰胺，青霉素105u/L，庆大霉素8×104u/L)的塑料培养瓶中，37℃,50mL/LCO2饱和湿度孵箱中培养,72h后更换培养基,以后每3~4d换液一次.当贴壁细胞达90%以上融合时，用2.5g/L胰酶0.2g/LEDTA消化后传代培养.传代第3代以后用于以下实验. 1.2.2MSCs表面分子测定用2.5g/L胰酶0.2g/LEDTA消化收获细胞,至少2×105个细胞与抗C
