人骨髓间充质干细胞体外支持脐血cd34+细胞增殖的研究论文

《人骨髓间充质干细胞体外支持脐血cd34+细胞增殖的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34+细胞增殖的研究论文马俐君，高磊，周虹，邱慧颖，胡晓霞，解琳娜，王健民【摘要】为了研究人骨髓间充质干细胞（MSC）作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用，将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系（HFCL）经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层.freelanMesenchymalStemCellsandFibroblastoidCellLineasFeederLayersonExpansionofUmbilicalCordBloodCD34+Cell

2、sInVitroAbstractToinvestigatetheeffectsofhumanmesenchymalstemcells(MSC)andhumanfibroblastoidcellline(HFCL)asfeederlayeronexpansionofumbilicalcordbloodCD34+cellsinvitro,60Coγ-rayirradiatedMSCandHFCLatterbersatday0aintainingtheLTC-ICofUCBCD34+cells,i.e.thenumb

3、erofCFU-GMcoloniesinthefifthoreobvious,i.e.thenumberofCFU-GMcoloniesinthefifthixedaintainingtheLTC-ICofUCBCD34+cells.coloniesaintainingtheexpansionofCD34+cellsandcytokinescanenhancethiseffect，aintainingtheLTC-ICofUCBCD34+cellsinvitro.MSCesenchymalstemcell；co

4、rdbloodCD34+cell；CD34+cellexpansion体内的稳态造血依赖于复杂而完整的骨髓造血微环境，人骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcell,MSC）是成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、脂肪细胞等多种骨髓造血微环境的重要组成细胞的前体细胞，在造血调控中起着关键的作用。有实验和临床研究证实，MSC与造血干/祖细胞（HSPC）共移植可促进移植后造血重建，然而具体机理目前尚无定论。明确MSC体外支持造血的作用对于进一步研究MSC在造血干细胞移植中的作用及提高MSC的效率具有重要意

5、义。为此我们进行了从体外到动物体内的系列研究。本研究报道在建立了成人骨髓MSC的大规模分离培养方法的基础上，通过比较MSC与早前建立的有明确体外支持造血作用的骨髓成纤维细胞样基质细胞系(humanfibroblastoidcellline,HFCL)作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的差异，明确MSC体外支持造血细胞增殖的能力，为进一步开展体内支持造血的研究提供实验依据。材料和方法细胞培养胎儿来源的成纤维细胞样人骨髓基质细胞系HFCL由中国医学科学院血液学研究所姜学英建系，本室保存［1］。人骨髓间充质

6、干细胞为复苏后的P3代冻存细胞（采集健康志愿者骨髓液，分离MSC并体外培养，流式细胞术检测各代细胞表面标志为CD34、CD45、CD14，CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD40、CD40L(CD154)和HLA-DR阴性，CD29、CD44、CD90、CD105和CD166阳性，体外能够诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞，详细数据另文发表）。MSC培养基为含10%FBS为主的低糖DMEM。CD34+细胞培养体系为IMDM中含15%HS、15%FBS、5×10-5mol/L氢化可的松、4mmol

7、/LL-谷氨酰胺。长期培养起始细胞（long-termculture-initiatingcells，LTC-IC）培养体系MyeloCultH5100和CFU-GM甲基纤维素培养基为加拿大StemCellTech产品。重组人Flt-3配体（rhFL)、重组人干细胞因子（rhSCF）、重组人血小板生长因子（rhTPO）等均为Sigma公司产品。脐血CD34+细胞的分离纯化脐血样品采用肝素抗凝，用淋巴细胞分离液（1077g/ml,购自中国医学科学院血液病研究所）获得脐血单个核细胞悬液后进行CD34+细胞纯化（M

8、ACS磁性分离试剂盒，购自MiltenyiBiotec公司，Germany）。纯化后的细胞悬液取样计数，以PE标记的鼠抗人CD34单克隆抗体（购自BectonDickinson公司，USA）标记细胞，流式细胞术测定CD34+细胞纯度。MSC与HFCL支持脐血CD34+细胞增殖作用的比较制备细胞滋养层将体外培养扩增的P3代MSC和基质细胞系HFCL按（1-5）×105个/孔的浓度接种于2