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1、成人骨髓间充质干细胞对脐血CD34+细胞的体外扩增作用论文贾明峰,侯相麟,赵丽,刘蓓,李娟,陈轩【关键词】骨髓细胞【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofadultbonemarroesenchymalstemcellsontheexpansionofumbilicalcordbloodCD34+cellsexvivo.METHODS:AdultbonemarroesenchymalstemcellsbilicalcordbloodCD34+cellsesenchymal
2、stemcells,stemcellfactor,Interleukin11andgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor,respectively.Attheendof3berofnucleatedcells,colonyformingcellsandCD34+cellsfor3esenchymalstemcellsandcytokinescoculturesystemssignificantlyenhancedtheexpansionofthecordblo
3、odcellsberofnucleatedcellsby114.2±2.4fold,colonyformingcellsby40.5±8.6foldandCD34+cellsby11.3±0.4fold,respectively.CONCLUSION:TheexpansionofumbilicalcordbloodCD34+cellscanbeenhancedexvivobyadultbonemarroesenchymalstemcellsbinedplification;CD34+cell;cordbloo
4、d;bonecells;stemcells【摘要】目的：探讨骨髓间充质干细胞(MSCS)对脐血CD34+细胞体外扩增作用.方法：分离培养成人MSCS作为滋养层，联合SCF,.freelesenchymalstemcells,MSCs）作为骨髓造血微环境中的一种重要细胞成分,近年来成为干细胞研究领域的一大热点.MSCs具有自我更新和多向分化潜能，在体外可被诱导分化为多种结缔组织及部分来源于外胚层的组织，形成骨、软骨、骨骼肌、腱、韧带、真皮、脂肪、骨髓基质和神经［1,2］.此外，还分泌多种生长因子支持骨髓造血，藉
5、此MSCs可在体外作为滋养细胞层进行造血干/祖细胞扩增.自脐血（umbilicalcordblood,UCB）中发现造血干细胞(hematopoieticstemcell,HSC)以来.freelany)；IMDM购自Gibco公司;胎牛血清(FBS)为杭州四季青公司产品;BSA、甲基纤维素、β巯基乙醇及L谷氨酰胺购自Sigma公司；重组人干细胞因子（rhSCF），重组人白细胞介素11（rhIL11）,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGMCSF），重组人粒细胞集落刺激因子（rhGCSF）,重组人红细胞生
6、成素（rhEPO）均购自Peprotech公司；荧光标记的抗CD34单克隆抗体（CD34PE）购自CoulterImmunotech公司；抗CD29,CD44,CD45和抗HLADR单克隆抗体购自PharMingen公司.1.2方法1.2.1MSCs的分离纯化及培养MSCs的分离纯化及培养按文献［3］介绍的方法进行.收集正常肝素抗凝骨髓约10mL，用Percoll溶液梯度离心,900g30min,收集中间相为有核细胞,然后将细胞按2×108/L密度接种于DMEMLG培养基(含100mL/LFBS,L谷氨酰胺，
7、青霉素105u/L，庆大霉素8×104u/L)的塑料培养瓶中，37℃,50mL/LCO2饱和湿度孵箱中培养,72h后更换培养基,以后每3~4d换液一次.当贴壁细胞达90%以上融合时，用2.5g/L胰酶0.2g/LEDTA消化后传代培养.传代第3代以后用于以下实验.1.2.2MSCs表面分子测定用2.5g/L胰酶0.2g/LEDTA消化收获细胞,至少2×105个细胞与抗CD29,CD44,CD45,HLADR抗体室温反应30min，PBS洗涤2次，后与FITC标记的二抗避光反应15min.细胞洗涤后悬浮于PBS
8、中，CoulterEpicsXL流式细胞仪分析相关数据.1.2.3脐血的采集、单个核细胞分离及CD34+细胞含量测定收集正常足月新生儿脐血,4℃保存运输,于4h内用淋巴细胞分离液分离单个核细胞（mononuclearcells,MNC）.取100μLMNC悬液上机检测CD34+细胞含量，具体方法是：取阴性对照（MouseIgG1）与荧光标记的CD34单抗（CD34PE）各20μL于试管底部，再分别加
