大鼠心脏中神经肽y的y1受体样免疫反应物质的定位

《大鼠心脏中神经肽y的y1受体样免疫反应物质的定位》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、大鼠心脏中神经肽Y的Y1受体样免疫反应物质的定位　　关键词:心脏;大鼠;Y1受体;神经肽Y　　摘要:目的为在细胞水平精确地确定神经肽Y（NPY）的Y1受体样免疫反应物质（-LI）在大鼠心脏中的分布.方法用免疫组织化学方法对Y1受体-LI细胞进行了检测.结果①一些心肌细胞含有Y1受体-LI，可见清晰的Y1受体免疫反应性（-Ir）条纹，此类细胞在心脏呈斑点状分布，接近外膜侧和室间隔的内膜侧分布较多，Y1受体-LI主要分布于心肌细胞膜、横小管膜和小泡上;②心脏内有Y1受体-LI的心内神经元，此类细胞有较长的突起，呈离散分布，与Y1受体-LI心

2、肌细胞或血管相邻，Y1受体-LI神经元的外膜和胞质内有较强的Y1受体-LI，尤以其突起明显.结论NPY对心脏作用的复杂性可能与Y1受体在心脏中多种细胞的广泛分布有关.　　Keymunoreactivity（-LI）inrathearts.METHODSY1-Rimmunoreactive（-Ir）cellsinedmunohistochemistry.RESULTSY1-R-LIecardiomyocytesofratheartsembraneoftheheartandtheinnermembraneofinterventricular

3、septum.Y1-R-LIainlydistributedovertheplasmalemmaofthecellandTtube，andsmallvesicles.Ontheotherhand，thereetimesclosetomyocardialcellsorbloodvessels.HighlevelofY1-R-LIalemmaandthecytoplasmofneurons，especiallyintheirprocesses.CONCLUSIONTheplicatedeffectsofNPYontheheartmayber

4、elatedtotheextensivedistributionofY1recep-torinvariedcellsoftheheart.　　0引言　　含神经肽Y（NPY）的神经纤维分布于整个心脏［1］.通常情况下，NPY与去甲肾上腺素（NA）共存于交感神经元，但大鼠心脏中约有半数的NPY神经纤维不与NA共存，而存在于心内神经元中［2］.根据药理学实验研究，NPY对心脏的作用至少通过两种以上的受体介导，即Y1，Y2和Y3等受体［3］.通过受体放射自显影方法观察到心脏有Y1受体的结合点［4］，用分子原位杂交方法也观察到人类心脏中有表达Y1

5、受体的mRNA［5］.但由于已往的检测方法对组织定位的精确性不够，无法在细胞水平精确地确定受体的位置.本研究用针对Y1受体C末端肽片段的一种纯化的抗血清［6，7］，用免疫组织化学方法研究大鼠心肌细胞和心内神经元Y1受体的分布.　　1材料和方法　　1.1免疫光镜组织化学方法SD大鼠（体质量200～250g）10只（本校实验动物中心提供），戊巴比妥钠（50mg・kg-1，ip）麻醉，经心脏灌注37℃生理盐水50mL和含40g・L-1多聚甲醛的0.1mol・L-1磷酸缓冲液（PB）50mL，再灌注4℃

6、同样固定液250mL，取心脏，放入4℃同样固定液后固定1.5h，200g・L-1蔗糖浸泡24h以上，用冰冻切片机（Leica，德国）切20μm的心脏矢状和冠状切片.根据免疫组织化学方法，将切片放入针对Y1受体C末端肽片段的一种纯化的兔抗血清（1∶8000）［6-8］中，用生物素标记的羊抗兔血清（1∶200）和VectorABC盒（Vector实验室，美国）孵育，用葡萄糖氧化酶、二甲基联苯胺（DAB）和硫酸镍胺加强法显色，标记物质呈深蓝色，经干燥、透明和DPX封片.在NikonMicrophot-FX显微镜下观察标本，Lei

7、ca图像处理系统（Leica-Q570C，德国）取像，出照片.　　1.2免疫电镜组织化学方法SD大鼠4只，麻醉、灌注和后固定同上，固定液为含50mL・L-1戊二醛和40g・L-1多聚甲醛的PB.取心脏，切50～100μm振动切片.免疫组织化学方法处理同上，进行常规DAB反应，标记物质呈棕色.在10g・L-1锇酸中处理30min，经梯度乙醇和环氧丙烷脱水后，在Epon812中浸润，做平板包埋，聚合后在光镜下定位，取材，在LKBⅢ超薄切片机上切片，不做铅铀染色，在JEOL-1200电子显微镜下观察，

8、拍照，出照片.　　用制备抗体用的合成的Y1受体C末端多肽片段以1μmol・L-1与Y1受体抗体预吸收24h（4℃）后，做以上免疫组织化学反应，以此检验抗血清免疫标记的特异性.　　2结果　　2.