大鼠心脏中神经肽y的y1 受体样免疫反应物质的定位论文

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1、大鼠心脏中神经肽Y的Y1受体样免疫反应物质的定位论文.freelmunoreactivity（-LI）inrathearts.METHODSY1-Rimmunoreactive（-Ir）cellsinedmunohistochemistry.RESULTSY1-R-LIecardiomyocytesofratheartsembraneoftheheartandtheinnermembraneofinterventricularseptum.Y1-R-LIainlydistributedovertheplasmalemmaofthecellandTtube，andsmallvesicl

2、es.Ontheotherhand，thereetimesclosetomyocardialcellsorbloodvessels.HighlevelofY1-R-LIalemmaandthecytoplasmofneurons，especiallyintheirprocesses.CONCLUSIONTheplicatedeffectsofNPYontheheartmayberelatedtotheextensivedistributionofY1recep-torinvariedcellsoftheheart.0引言含神经肽Y（NPY）的神经纤维分布于整个心脏［1］.通常情况下，

3、NPY与去甲肾上腺素（NA）共存于交感神经元，但大鼠心脏中约有半数的NPY神经纤维不与NA共存，而存在于心内神经元中［2］.根据药理学实验研究，NPY对心脏的作用至少通过两种以上的受体介导，即Y1，Y2和Y3等受体［3］.通过受体放射自显影方法观察到心脏有Y1受体的结合点［4］，用分子原位杂交方法也观察到人类心脏中有表达Y1受体的mRNA［5］.但由于已往的检测方法对组织定位的精确性不够，无法在细胞水平精确地确定受体的位置.本研究用针对Y1受体C末端肽片段的一种纯化的抗血清［6，7］，用免疫组织化学方法研究大鼠心肌细胞和心内神经元Y1受体的分布.1材料和方法1.1免疫光镜组织化学方法

4、SD大鼠（体质量200～250g）10只（本校实验动物中心提供），戊巴比妥钠（50mgkg-1，ip）麻醉，经心脏灌注37℃生理盐水50mL和含40gL-1多聚甲醛的0.1molL-1磷酸缓冲液（PB）50mL，再灌注4℃同样固定液250mL，取心脏，放入4℃同样固定液后固定1.5h，200gL-1蔗糖浸泡24h以上，用冰冻切片机（Leica，德国）切20μm的心脏矢状和冠状切片.根据免疫组织化学方法，将切片放入针对Y1受体C末端肽片段的一种纯化的兔抗血清（1∶8000）［6-8］中，用生物素标记的羊抗兔血清（1∶200）和VectorABC盒（Vector实验室，美国）孵育，用葡萄

5、糖氧化酶、二甲基联苯胺（DAB）和硫酸镍胺加强法显色，标记物质呈深蓝色，经干燥、透明和DPX封片.在NikonMicrophot-FX显微镜下观察标本，Leica图像处理系统（Leica-Q570C，德国）取像，出照片.1.2免疫电镜组织化学方法SD大鼠4只，麻醉、灌注和后固定同上，固定液为含50mLL-1戊二醛和40gL-1多聚甲醛的PB.取心脏，切50～100μm振动切片.免疫组织化学方法处理同上，进行常规DAB反应，标记物质呈棕色.在10gL-1锇酸中处理30min，经梯度乙醇和环氧丙烷脱水后，在Epon812中浸润，做平板包埋，聚合后在光镜下定位，取材，在LKBⅢ超薄切片机上

6、切片，不做铅铀染色，在JEOL-1200电子显微镜下观察，拍照，出照片.用制备抗体用的合成的Y1受体C末端多肽片段以1μmolL-1与Y1受体抗体预吸收24h（4℃）后，做以上免疫组织化学反应，以此检验抗血清免疫标记的特异性.2结果2.1心肌细胞大鼠心脏内一些心肌细胞可见中等强度的蓝黑色着色，为Y1受体-LI（Fig1），可见清晰的Y1受体-Ir标记条纹，为心肌细胞内横小管结构，有的与心脏内Y受体-LI血管相邻（Fig2）.左右心房、左右心室、房间隔、室间隔和房室瓣膜上均有Y1标记-Ir心肌细胞，此类细胞在心脏呈散在的不均匀分布，近心外膜侧分布较多（Fig3），尤以左心室最明显，室间

7、隔近心内膜的两侧分布也较多.在电镜下可以观察到一些心肌细胞的外膜上有精细和间断的Y1受体-LI标记，近胞质处有颗粒样的Y1受体-LI标记物，也可见正在内吞的有Y1受体-LI标记的小泡（Fig4）.在横小管两侧膜上有Y1受体-LI标记（Fig5），常在相邻的数个横小管中同时出现，也可间隔出现.2.2神经元大鼠心脏内有较强标记的Y1受体-Ir神经元（Fig6，7），这些神经元体积小，并有多个突起，有的突起较长，此类细胞在心脏内呈离散分布，单个存在，常与Y1受体