重组人神经肽y受体y1融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果重组人神经肽Y受体Y1融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究作者：丁克祥董萍　郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华【摘要】目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY1受体，并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28aY1转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDSPAGE检测和WesternBlot鉴定,表达产物包涵体经Ni2+NTA亲和

2、层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y1受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28aY1重组质粒的DE3菌，表达出重组人Y1融合蛋白。重组蛋白经Ni2+NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y1受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28aY1在大肠杆菌DE3中成功表达，亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白，并对Y1受体蛋白的生物学特征进行了预测，为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。【关键词】人神经肽YY1受体;融合蛋白;包涵体;纯化;生物信息学【Abstract】Obje

3、ctiveToexpresshumanY1receptorprotEininE.coli，purifyandidentifyit，and课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果conductbioinformaticanalysisofY1receptorprotEIn.MethodsTherecombinantplasmidpET28a

4、Y1whichhadbeenwellconstructedandsequentiallyconfirmedwastransplantedinto(DE3)andinducedbyIPTGtoexpressfusionproteins.SDSPAGEandWesternblotwereusedtotestandidentifytheexpressedfusionproteins.TheinclusionbodyoftheexpressedproductwaspurifiedbyNi2+NTAaffinitychromatography.Th

5、enbioinformaticanalysisoftheY1receptorwasconductedwiththehelpofrelatedonlinesoftware.ResultsAfterbeinginducedbyIPTG，theDEwithrecombinantplasmidpET28aY1expressedrecombinanthumanY1receptorprotein.HighlypurifiedfusionproteinwasobtainedbyNi2+NTAaffinitychromatography.Relatedb

6、iologicalcharacteristicsofY1receptorwereobtainedaftertheonlinesoftwareanalysis.ConclusionsTherecombinantplasmidpET28aY1canbesuccessfullyexpressedinDE3.HighlypurifiedproteinscanbeobtainedbyNi2+NTAaffinitychromatography.Y1receptor′sbiologicalcharacteristicsarepredicted,whic

7、hlayfoundationforfurtherstudiesofY1receptorprotein′s课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果biologicalfunctionandantibodydevelopment.【Keywords】NeuropeptideYY1receptor;Fusionprotein;Inclusionb

8、ody;Purification;Bioinformatics神经肽Y(Neuropeptide,NPY)是一种内源性的促食欲因子，NPY主要通过与相应受体结合起作