重组人神经肽y融合蛋白的表达、纯化及生物信息学分析研究_论文

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1、重组人神经肽Y融合蛋白的表达、纯化及生物信息学分析研究作者：丁克祥董萍郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华【摘要】目的在大肠杆菌中表达人神经肽Y，并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28aNPY转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDSPAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析NPY蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28aNPY重组质粒的DE3菌，表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni2+NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯

2、度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了NPY的相关生物学特性。结论重组质粒pET28aNPY在大肠杆菌DE3中成功表达，亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白，并对NPY蛋白的生物学特征进行了预测，为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。【关键词】人神经肽Y;融合蛋白;包涵体;纯化;生物信息学【Abstract】ObjectiveToexpresshumanneuropeptideY(NPY)proteininE.coli，purifyand8/8identifyit，andconductbioinformaticanalysisofNPYprotein.MethodsThereco

3、mbinantplasmidpET28aNPYwhichhadbeenwellconstructedandsequentiallyconfirmedwastransplantedintoE.coliBL21(DE3)andinducedbyIPTGtoexpressfusionproteins.SDSPAGEandWesternblotwereusedtotestandidentifytheexpressedfusionproteins.TheinclusionbodyoftheexpressedproductwaspurifiedbyNi2+NTAaffinitychromatogra

4、phy.ThenbioinformaticanalysisoftheNPYproteinwasconductedwiththehelpofrelatedonlineAfterbeinginducedbyIPTG，theDE3withrecombinantplasmidpET28aNPYexpressedrecombinanthumanNPYprotein.HighlypurifiedNPYfusionproteinwasobtainedbyNi2+NTAaffinitychromatography.RelatedbiologicalcharacteristicsofNPYwereobtai

5、nedaftertheonlinesoftwareanalysis.ConclusionsTherecombinantplasmidpET28aNPYcanbesuccessfullyexpressedinDE3.HighlypurifiedproteinscanbeobtainedbyNi2+NTAaffinitychromatography.NPY′sbiologicalcharacteristicsarepredicted,whichlays8/8foundationforfurtherstudiesofNPY′sbiologicalfunctionandantibodydevelo

6、pment.【Keywords】NeuropeptideY;Fusionprotein;Inclusionbody;Purification;Bioinformatics　人神经肽Y(Neuropeptide,NPY)是一个由36个氨基酸组成的多肽,广泛分布于中枢和外周神经系统。此外,NPY也存在于其他组织、器官及腺体中。NPY影响摄食行为、激素分泌、心血管功能、调节体温、生物节律、性行为及情绪等各种生物功能,故越来越受到人们的重视。NPY释放后主要通过NPY受体起作用，不同受体起不同的作用,各组织所含受体种类及分布密度也不相同〔1，2〕。近来研究表明NPY可在局部作用于内皮细胞及脂肪细胞上Y

7、2受体，促进局部脂肪组织生长。而且在NPY的作用下，局部脂肪移植物可存活更长时间不被机体吸收〔3，4〕。据此，理论上不仅可通过局部增加NPY的量，使更多的NPY作用于Y2受体促进该部位脂肪组织的增加;还可通过局部注入NPY抗体，使其中和游离的NPY蛋白，减少NPY与Y2受体的结合而达到该部位脂肪组织减少的效果。即以NPY为靶标，促进脂肪组织的转移。为此,本研究用基因克隆技术在大肠杆菌中制备NPY的