重组人神经肽y受体y1融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究_论文

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1、重组人神经肽Y受体Y1融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究作者：丁克祥董萍　郑永晨杨永鹏朱晓亮韩晋云单志新丁宇丁振华【摘要】目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY1受体，并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28aY1转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDSPAGE检测和WesternBlot鉴定,表达产物包涵体经Ni2+NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y1受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28aY1重组质粒的DE3菌，表达出

2、重组人Y1融合蛋白。重组蛋白经Ni2+NTA亲和层析进行纯化后，得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y1受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28aY1在大肠杆菌DE3中成功表达，亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白，并对Y1受体蛋白的生物学特征进行了预测，为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。【关键词】人神经肽YY1受体;融合蛋白;包涵体;纯化;生物信息学【Abstract】ObjectiveToexpresshumanY18/8receptorproteininE.coli，purifyandiden

3、tifyit，andconductbioinformaticanalysisofY1receptorprotein.MethodsTherecombinantplasmidpET28aY1whichhadbeenwellconstructedandsequentiallyconfirmedwastransplantedinto(DE3)andinducedbyIPTGtoexpressfusionproteins.SDSPAGEandWesternblotwereusedtotestandidentifytheexpressedfu

4、sionproteins.TheinclusionbodyoftheexpressedproductwaspurifiedbyNi2+NTAaffinitychromatography.ThenbioinformaticanalysisoftheY1receptorwasconductedwiththehelpofrelatedonlinesoftware.ResultsAfterbeinginducedbyIPTG，theDE3withrecombinantplasmidpET28aY1expressedrecombinanthu

5、manY1receptorprotein.HighlypurifiedfusionproteinwasobtainedbyNi2+NTAaffinitychromatography.RelatedbiologicalcharacteristicsofY1receptorwereobtainedaftertheonlinesoftwareanalysis.ConclusionsTherecombinantplasmidpET28aY1canbesuccessfullyexpressedinDE3.Highlypurifiedprote

6、inscanbeobtainedbyNi2+NTAaffinitychromatography.Y1receptor′sbiological8/8characteristicsarepredicted,whichlayfoundationforfurtherstudiesofY1receptorprotein′sbiologicalfunctionandantibodydevelopment.【Keywords】NeuropeptideYY1receptor;Fusionprotein;Inclusionbody;Purificati

7、on;Bioinformatics　神经肽Y(Neuropeptide,NPY)是一种内源性的促食欲因子，NPY主要通过与相应受体结合起作用。其受体(Receptor)主要有Y1、Y2、Y3、Y4、Y5和Y6受体亚型,属于G蛋白偶联的受体家族。这些受体亚型介导信息传导均与G蛋白偶联有关,均能抑制腺苷酸环化酶的生物合成,最终动员或抑制钙离子释放。不同受体起不同的作用,各组织所含受体种类及分布密度也不相同〔1～4〕。NPYY1、Y2和Y5受体(NPY1R,NPY2R,NPY5R)被认为与NPY诱导摄食和引起肥胖的作用机制有关。实验表明,在N

8、PY1R缺失小鼠中NPY诱导的摄食效应明显减弱〔5〕;肥胖大鼠口服NPY1R抑制剂能够抵抗肥胖〔6〕;NPY1R抑制剂脑室注射能减少大鼠或小鼠的摄食〔7，8〕。这充分说明,NPY1R在大鼠和小鼠的食物摄取和