rb基因产物在大鼠肝细胞癌变过程中的异常表达及意义

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1、Rb基因产物在大鼠肝细胞癌变过程中的异常表达及意义：韩克强，吴娅利，梁平△，李靖，王细文，黄小兵【摘要】　　目的探讨肝细胞癌变过程中Rb基因产物(Rb蛋白)的异常表达及其意义。方法用0.2%二乙基亚硝胺(DEN)诱导ethods0.2%N-nitrosodethylamine(DEN)themodelofhepatocellularcarcinoma(HCC),andtheexpressionofRbproteininHCCcarcinogenesisandmetastasismunohistochemicalmethod.Results20rat

2、sincontrolgroupallshoetastasis)group,andonly3ratsoutofthe18ratsinHCC(etastasis)hadtheexpressionofRbprotein.ConclusionsUhepositiveexpressionrateofRbproteindecreasesgraduallyayassistthatRbproteinplayaninhibitingroleinhepatocellularcarcinoma,itsinactivitymaypromotethegenesisofHCC

3、andiscloselyrelatedtotheprogressandmetastasisofHCC.　　KEYRI扫描后处死，并解剖观察肝脏成瘤情况及有无转移，对照组同时处死4只。取部分漂洗后肝脏放于10%中性福尔马林固定，留做病理学检查及免疫组化检测，光镜观察肝脏病理变化，按大鼠肝肿瘤国际组织学分类标准进行形态判定［4］，并按分化程度分级。其余肝脏投入液氮备用。实验过程中有41只大鼠死亡，对照组全部存活，实验组累计检测标本107例。　　1.2.2免疫组织化学检测石蜡切片按S-P试剂盒要求操作，经脱蜡、脱水，消除内源性过氧化物酶活性后，进行微波抗

4、原修复。依次滴加正常山羊血清、一抗(1:200稀释)、二抗、辣根酶标记的链霉卵白素工作液，DAB显色后常规复染、脱水、透明、封片，光镜观察、拍照。以0.02MPBS代替一抗作阴性对照，以正常大鼠肝脏切片作阳性对照。　　1.2.3免疫组化结果判定细胞染色阳性以细胞核或细胞浆着棕黄色或棕褐色为准，染色结果参照MarkKelley实验室标准［5］进行肿瘤细胞阳性计分。首先在高倍镜下计数1000个肿瘤细胞，避开肿瘤边缘及坏死区域，根据阳性肿瘤细胞数目所占百分比得出细胞核或细胞浆标记指数（Labelingindex,LI），即细胞核或细胞浆LI＝阳性瘤细胞数

5、/1000个肿瘤细胞×100%。分为以下四级计分：<10%记为0分，10%～25%记为1分，25%～50%记为2分，>50%记为3分；染色强度按大多数肿瘤细胞着色的深浅计分：阴性记为0分，显色为黄色（弱阳性）记为1分，显色为棕黄色（中等阳性）记为2分，显色为棕褐色（强阳性）记为3分。再将这两项分值相加的总积分即为免疫组化的阳性分度：0分为阴性，记为(-)；1～2分为弱阳性，记为(+)；3～4分为阳性，记为(++)；5～6分为强阳性，记为(+++)。　　1.3统计学方法免疫组化结果应用SPSS11.0统计软件χ2检验进行分析。P<0

6、.05或P<0.01表示差异显著或非常显著。　　2结果　　2.1肝细胞癌形成、发展过程中的病理变化Wistar大鼠在诱导16周以前病理主要以肝硬化为主，并出现4例肝细胞癌（高分化肝癌为主）。诱导第17～22周以肝细胞癌为主，第23周及以后多出现转移，腹腔内可见肿大的淋巴结，可见肝内、门脉、肺脏及腹腔等处转移，部分有血性腹水。大鼠肝细胞癌（其中以梁索型和腺样型居多）病理分级可分为高分化、中分化及低分化三级，本组例数分别为35、29、22例。对照组未发现异常病理改变。见表1。　　表2Rb蛋白在不同病变肝组织中的表达（略）　　四组间比较，χ2＝34

7、.416，P＝0.000　　Rb蛋白阳性产物呈棕黄色或棕褐色，定位在细胞核。Rb蛋白在正常的肝细胞呈阳性表达，而在肝硬化及肿瘤组织中Rb蛋白均有不同程度的失表达。在诱癌过程中，Rb蛋白的阳性表达率随病变程度的加重而逐渐降低，四组间相差非常显著(P<0.01)。其中肝硬化组表达稍低，与对照组无显著差异(P>0.05)，而未转移肝癌组与肝硬化组有非常显著差异(P<0.01)，伴转移肝癌组中的表达率最低，与未转移肝癌组相比差异非常显著(P<0.01)。见表2、图1、图2。　　图1Rb蛋白在不同病变肝组织中的表达（略）　　图2Rb蛋

8、白在不同病变肝组织中的表达情况（IHC，SP法）（略）　　A：正常肝组织；B：肝硬化；C：肝癌(未转移)；D：肝癌(伴转移