rb基因产物在大鼠肝细胞癌变过程中的异常表达及意义

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1、Rb基因产物在大鼠肝细胞癌变过程中的异常表达及意义作者：韩克强，吴娅利，梁平△，李靖，王细文，黄小兵【摘要】　　目的探讨肝细胞癌变过程中Rb基因产物(Rb蛋白)的异常表达及其意义。方法用0.2%二乙基亚硝胺(DEN)诱导Wistar大鼠建立肝癌动物模型，应用免疫组化法检测Rb蛋白在大鼠肝脏癌变及转移过程中的表达。结果正常组20只中均见Rb蛋白表达，肝硬化组21只中有18只Rb蛋白过表达，肝癌组（未转移）68只中有37只Rb蛋白过表达，肝癌组（伴转移）18只中有3只Rb蛋白过表达。结论Rb蛋白的阳性表达率随病变程度的加重而逐渐降低，这辅证了Rb蛋白在肝细胞癌形成过程中发挥抑癌作用，Rb蛋白的失

2、活可能促进肝癌形成，并与肝癌的发展、转移密切相关。【关键词】肝细胞癌Rb基因免疫组化大鼠　　AbstractObjectiveTodiscusstheabnormalexpressionofretinoblastomaprotein(Rb)geneproductinthehepatocellularcarcinogenesisanditssignificance.Methods0.2%N-nitrosodethylamine(DEN)wasappliedtoinduceWistarratstoformthemodelofhepatocellularcarcinoma(HCC),andthee

3、xpressionofRbproteininHCCcarcinogenesisand10metastasiswasdetectedwithimmunohistochemicalmethod.Results20ratsincontrolgroupallshowedtheexpressionofRbprotein,18ratsoutofthe21ratsinlivercirrhosisgrouphadtheexpressionofRbproteinaswellas37ratsoutofthe68ratsinHCC(withoutmetastasis)group,andonly3ratsoutof

4、the18ratsinHCC(withmetastasis)hadtheexpressionofRbprotein.ConclusionsUhepositiveexpressionrateofRbproteindecreasesgraduallywiththeaggravationoflesiondegree,whichmayassistthatRbproteinplayaninhibitingroleinhepatocellularcarcinoma,itsinactivitymaypromotethegenesisofHCCandiscloselyrelatedtotheprogress

5、andmetastasisofHCC.　　KEYWORDShepatocelluarcarcinomaRbgeneimmunohistochemistryrat10　　近年来的研究表明，细胞周期调节失控是癌变的重要原因。抑癌基因Rb(视网膜母细胞瘤基因)编码的蛋白Rb是细胞周期重要的调节因子，在细胞周期G1到S期中主要起负调节作用，以防止细胞增殖失控向肿瘤性增生转化。已经在人类多种肿瘤中发现Rb基因的突变或缺失，但其在肝细胞肝癌(HCC)发生发展中的抑癌机制尚未完全阐明。为进一步评价Rb蛋白在肝癌形成及发展中的作用，我们应用二乙基亚硝胺(DEN)构建了大鼠肝细胞癌模型，动态观察肝细胞由正常、

6、肝硬化、肝癌到转移这个过程中Rb蛋白表达的变化，来验证Rb蛋白与肿瘤的关系，从而为研究肿瘤的基因治疗提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1实验动物实验用清洁级雄性Wistar大鼠140只，9～10周龄，体重150g±20g，购自第三军医大学野战外科研究所实验动物中心。　　1.1.2试剂和仪器二乙基亚硝胺(DEN)购自美国Sigma公司，兔抗鼠免疫IgG(Rb蛋白)多克隆抗体多克隆抗体购自美国SantaCruz公司，S-P免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒、抗体稀释液购自北京中山生物技术有限公司。IX70型相差倒置显微镜购自日本Olympus公司。　　1.2方法　　1.2

7、.1大鼠肝细胞癌模型的制备10实验大鼠随机分为对照组和实验组，实验组120只，对照组20只。实验组参考文献方法［1～3］，并改进方法诱导肝细胞癌模型，经口咽插管至胃灌喂0.2%二乙基亚硝胺(DEN)溶液，每天1ml，每周连续灌喂5天，其余2天自由饮水，至第19周完后停止给药，对照组以同样方法灌喂等量生理盐水。于诱导第16、18、20、22、25周分批行MRI扫描后处死，并解剖观察肝脏成瘤情况及有无转移，对照组