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1、Rb基因产物在大鼠肝细胞癌变过程中的异常表达及意义论文韩克强，吴娅利，梁平△，李靖，王细文，黄小兵【摘要】目的探讨肝细胞癌变过程中Rb基因产物(Rb蛋白)的异常表达及其意义。方法用0.2%二乙基亚硝胺(DEN)诱导ethods0.2%N-nitrosodethylamine(DEN)themodelofhepatocellularcarcinoma(HCC),andtheexpressionofRbproteininHCCcarcinogenesisandmetastasismunohistochemicalm
2、ethod.Results20ratsincontrolgroupallshoetastasis)group,andonly3ratsoutofthe18ratsinHCC(etastasis)hadtheexpressionofRbprotein.ConclusionsUhepositiveexpressionrateofRbproteindecreasesgraduallyayassistthatRbproteinplayaninhibitingroleinhepatocellularcarcinoma,i
3、tsinactivitymaypromotethegenesisofHCCandiscloselyrelatedtotheprogressandmetastasisofHCC.KEYRI扫描后处死，并解剖观察肝脏成瘤情况及有无转移，对照组同时处死4只。取部分漂洗后肝脏放于10%中性福尔马林固定，留做病理学检查及免疫组化检测，光镜观察肝脏病理变化，按大鼠肝肿瘤国际组织学分类标准进行形态判定［4］，并按分化程度分级。其余肝脏投入液氮备用。实验过程中有41只大鼠死亡，对照组全部存活，实验组累计检测标本107例。1.2
4、.2免疫组织化学检测石蜡切片按S-P试剂盒要求操作，经脱蜡、脱水，消除内源性过氧化物酶活性后，进行微波抗原修复。依次滴加正常山羊血清、一抗(1:200稀释)、二抗、辣根酶标记的链霉卵白素工作液，DAB显色后常规复染、脱水、透明、封片，光镜观察、拍照。以0.02MPBS代替一抗作阴性对照，以正常大鼠肝脏切片作阳性对照。1.2.3免疫组化结果判定细胞染色阳性以细胞核或细胞浆着棕黄色或棕褐色为准，染色结果参照MarkKelley实验室标准［5］进行肿瘤细胞阳性计分。首先在高倍镜下计数1000个肿瘤细胞，避开肿瘤边缘及
5、坏死区域，根据阳性肿瘤细胞数目所占百分比得出细胞核或细胞浆标记指数（Labelingindex,LI），即细胞核或细胞浆LI＝阳性瘤细胞数/1000个肿瘤细胞×100%。分为以下四级计分：10%记为0分，10%～25%记为1分，25%～50%记为2分，50%记为3分；染色强度按大多数肿瘤细胞着色的深浅计分：阴性记为0分，显色为黄色（弱阳性）记为1分，显色为棕黄色（中等阳性）记为2分，显色为棕褐色（强阳性）记为3分。再将这两项分值相加的总积分即为免疫组化的阳性分度：0分为阴性，记为(-)；1～2分为弱阳性，记为(
6、+)；3～4分为阳性，记为(++)；5～6分为强阳性，记为(+++)。1.3统计学方法免疫组化结果应用SPSS11.0统计软件χ2检验进行分析。P0.05或P0.01表示差异显著或非常显著。2结果2.1肝细胞癌形成、发展过程中的病理变化,GebhardtR,SirmaH,.freeline［J］.Carcinogenesis,1993,14(10):2149～2156.［3］梁晓俐,钟光汉,左声鹤.二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的病理形态学研究［J］.第三军医大学学报,1991,13(1):32.［4］SellS,D
7、unsfordHA.Evidenceforthestemcelloriginofhepatocellularcarcinomaandcholangiocarcinoma［J］.Am-J-Pathol,1989,134(6):1347～1363.［5］DongeihuaL,MarkKelley.Humanapurinicendonucleasa1(APE1)expressingandprognosticsignificanceinosteosara:Enhancedsensitivityofosteosarato
8、DNAdamagingagentsusingsilencingRNAAPE1expressioninhibition［J］.MolCancerTher,2004,3(6):679～686.［6］王兆文,彭志海,唐华美,等.p16/Rb蛋白表达及核因子-κB活性在肝细胞肝癌中的意义［J］.中华医学杂志,2004,84(3):225～228.［7］FriendSH,BernardR,Rog
