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《nkg2d配体的表达直接影响nk细胞对不同发育阶段dc的杀伤》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、NKG2D配体的表达直接影响NK细胞对不同发育阶段DC的杀伤：涂三芳,郭坤元,胡亮衫,梅家转,周健,孙明【摘要】 目的:探讨NKG2D配体在不同发育阶段树突状细胞（DC）表面的表达及其对自然杀伤（NK）细胞杀伤活性的影响。方法:用细胞因子（rhIL-4、rhGM-CSF、TNF-α）体外诱导培养单核细胞的未成熟树突状细胞（iDC）和成熟树突状细胞（mDC）并鉴定形态和表型,免疫磁珠法分离纯化NK细胞。流式细胞术（FCM）检测iDC和mDC表面NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3的表达。用LDH释放法检测NK细胞对iDC和mDC的杀伤活性以及抗NKG2D单克隆抗体(mAb)阻断N
2、K细胞后的杀伤活性。结果:培养的iDC和mDC具有典型的细胞形态和免疫表型特征。iDC表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP3,表达率分别为(32.39±8.30）%、(17.75±3.40)%、(26.71±6.48)%、(38.37±6.89)%;mDC表面表达MICA、ULBP3,表达率分别为(7.82±2.67)%、(8.36±2.42)%,比iDC表面相应配体表达率低（P<0.01）。各效靶比NK细胞对iDC的杀伤活性均比对mDC的杀伤活性高,差异有统计学意义(P<0.01)。抗NKG2DmAb阻断NK细胞后对iDC杀伤活性比阻断前减弱(P<0.0
3、5);对mDC的杀伤活性与阻断前相比无统计学意义(P>0.05)。结论:NKG2D配体在iDC表面表达高,介导了NK细胞对iDC的杀伤,而对mDC的杀伤无影响,是NK细胞对iDC选择性高杀伤的分子机制之一。【关键词】NKG2D配体自然杀伤细胞树突状细胞 ［Abstract］AIM:ToinvestigatetheexpressionofNKG2Dligandsondendriticcells（DC）atdifferentdevelopmentstagesanditseffectoncytotoxicityofnaturalkiller（NK）cells.METHODS:Them
4、onocytesmaturedendriticcells（iDC）andmaturedendriticcells（mDC）normalperipheralbloodbyCD56antibodymagicisolation.TheexpressionofNKG2Dligands(MICA/B,ULBP1-3)etry.CytotoxicityofNKcellsandtheNKcellsblockedAbsagainstiDCandmDCethod.RESULTS:IDCandmDCorphologyandphenotypes.MICA,MICB,ULBP1,andULBP3DCandth
5、eirexpressionrateDC(P<0.01).AttheeachE∶TratiocytotoxicityofNKcellsagainstiDCDC(P<0.01).cytotoxicityofNKcellsblockedAbagainstiDCAbagainstmDCshoDC,portantroleinthecytotoxiceffectofNKcellsagainstiDC,buthasnoeffectonthataginstmDC.NKG2D-NKG2DligandsshooleculermechanismsthatNKcellskilliDCselecti
6、vly. ［Keyega公司产品。CD3FITC、CD16PECD56PEmAb为BD公司产品。FITC或PE标记的鼠抗人CD80、CD86、HLA2DR、CD83、CD1a单克隆抗体(mAb)及其同型对照均为eBiosience公司产品。鼠抗人NKG2D、MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3mAb和FITC标记的兔抗鼠IgG1购自RnD公司。FACScabilur型流式细胞仪为Beckman-Coulter公司产品。 1.2方法 1.2.1人外周血单核细胞的iDC与mDC体外诱导培养与鉴定常规分离健康志愿者外周血单个核细胞,以4×109/L细胞密度接种在6孔板
7、中,置于37℃、50mL/LCO2培养箱中贴壁培养4h后,去除非贴壁细胞,加入含20μg/LrhIL-4、50μg/LrhGM-CSF、100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养液,置于培养箱培养,隔天半量换液,补充等量细胞因子。第6天补加80μg/L的TNF-α,共培养9d。每天倒置显微镜下观察细胞形态。收集第6天和第9天细胞用25mL/L戊二醛固定,漂洗,脱水,乙酸异物脂置换,干燥,喷金后上机用扫描电子显微镜观察鉴定其形态。同样收集第6天
