不同肿瘤细胞表面mica的表达及nk细胞杀伤活性的研究的论文

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1、不同肿瘤细胞表面MICA的表达及NK细胞杀伤活性的研究的论文【摘要】目的：观察不同肿瘤细胞表面mica的表达及其对nk细胞杀伤活性的影响。方法：以体外培养的k562（人慢性髓原白血病细胞株）、mcf7(乳腺癌细胞株)、hr8348(直肠腺癌细胞株)、e2(人鼻咽癌细胞株)、hela(人宫颈癌细胞株)为靶细胞，流式细胞仪检测细胞表面mica的表达，以k562细胞作为对照，应用ldh释放法检测不同效靶比情况下体外培养的nk细胞对靶细胞的杀伤活性。结果：k562、mcf7、hr8348、e2、he

2、la细胞表面均表达mica，体外杀伤试验表明nk细胞对上述肿瘤细胞均有杀伤活性，antimica单抗可部分封闭nk细胞对靶细胞的杀伤活性。结论：nk细胞对k562、mcf7、hr8348、e2、hela细胞具有较高的杀伤活性，可作为一种生物治疗手段。【关键词】自然杀伤细胞mica自然杀伤细胞受体细胞毒性试验　　analysisoftheexpressionofmicaontumorcelllinesofdifferenthistotypesandtheirsensitivitytonkcytot

3、oxicity　　meijiazhuan,guokunyuan,ei,changhong.　　departmentofhematology,zhujianghospital,thesouthernmedicaluniversity,guangzhou510282,china　　［abstract］objective:toinvestigatetheexpressionofmhcclassⅰchainrelatedgenea(mica)ondifferenthumantumorcells(k562,

4、mcf7,hr8348,e2,hela)andtheirsensitivitytonkcytotoxicity.methods:cytotoxicityofnkcells(isolatedfrom3healthypersons)icaeasuredbyfacs.results:differentlevelofmicaorcelllines,antimicamabcouldpartiallyinhibitthecytotoxicityofnkcells.conclusion:nkg2dmicai

5、nteractioncantriggerthecytotoxicityofnkcellsagainsttumor,nkcellscanbeakindofeffectorcellforthetreatmentofsomecertaintumors.　　［keyica；nkcellreceptor　　nk细胞对靶细胞的识别无mhc限制性,可以在无预先致敏的情况下杀伤肿瘤细胞,是机体抗肿瘤免疫的第一道天然防线。.mica是nk细胞表面重要活化受体nkg2d的配体,主要表达于应激条件下的肠粘膜上皮细胞及上皮源性

6、的肿瘤细胞,如肺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌和结肠癌等，它通过与nkg2d结合可以直接活化nk细胞,提高nk细胞对靶细胞的杀伤活性。本文主要探讨不同肿瘤细胞表面mica的表达及其对nk细胞的杀伤活性影响。　　1材料与方法　　1.1材料分离nk细胞用的缓冲液（磷酸盐缓冲液，ph7.2，加入0.5%bsa,2mmol/ledta，miltenyibiotec公司产品），抗cd56免疫磁珠（miltenyibiotec公司产品），鼠抗人mica单抗（amo1，igg1）由德国alexander.stei

7、nle教授惠赠，fitc标记的山羊抗小鼠igg(ebioscience公司产品)，rpmi1640(gibco公司产品)，淋巴细胞分离液购自上海试剂二厂，rhil2为上海华新公司产品，杀伤活性检测试剂盒(cytotox96nonradioactivecytotoxocityassay)购自promega公司，人鼻咽癌细胞株e2购自军科院李春海教授，乳腺癌细胞株mcf7由我院苏国强博士惠赠，人慢性髓原白血病细胞株k562由我科冻存，直肠腺癌细胞株hr8348及宫颈癌细胞株hela购自中科院上海细胞

8、库。　　1.2nk细胞的分离纯化用淋巴细胞分离液常规分离健康个体外周血单个核细胞,经pbs洗涤2次，计数细胞，然后按每107细胞加入80μl缓冲液及20μl抗cd56免疫磁珠，4℃避光孵育15分钟后，然后每107细胞加入1ml的缓冲液，300r/min离心10分钟，去上清，每108细胞加入500μl的缓冲液，将悬浮好的细胞倒入minimacs磁场中，进行磁珠分离，用一个无菌的试管收集流出的阴性细胞，加入500μl的缓冲液冲洗分选的细胞，共3