nkg2d介导nk细胞对鼻咽癌细胞杀伤作用的体外研究论文

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1、NKG2D介导NK细胞对鼻咽癌细胞杀伤作用的体外研究论文梅家转，郭坤元，魏红梅，常红，宋朝阳【摘要】目的探讨鼻咽癌E2细胞表面HLAI类分子表型和NKG2D配体的表达情况，进一步了解其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3在K562、E2细胞的表达情况。PCRSSP法分析E2细胞HLAA、B、ColeculesandtheexpressionofNKG2Dligandsinhumannasopharyngealcarcinomacellline(E2)andtheireffectsoncytotoxic

2、ityofnaturalkiller(NK)cells.MethodsTheexpressionofNKG2DligandsonthesurfaceofE2andK562cellsetry.TheHLAclassImoleculesinE2cellsandkillercellimmunoglobulinlikereceptors(KIR)expressedbyNKcells(isolatedfrom5healthypersons)ents,differentantiNKG2Dligandsmonoclonalantibodies(mAbs)ismatchesbetoleculesexp

3、ressedbytheE2cells.NKcellsdisplayedhighlyinvitrocytotoxicityagainstK562andE2cellsentsconfirmedthatkillingofK562byNKcellsAb,.freelAb,antiULBP1mAb,antiULBP2mAbandantiULBP3mAb.antiMICAmAb.AntiMICBmAb,antiULBP2mAbcouldpartiallyinhibitthecytotoxicityofNKcellsagainstE2cells,AbandantiULBP3mAbcouldn

4、otinhibitthecytotoxicityofNKcells.ConclusionExpressionofNKG2DligandsiscorrelatedediatedcytolyticactivitymaybeboostedbyengineeringcellsexpressinghighlevelsofactivatingNKG2Dligands.Keymunoglobulinlikereceptor0引言NK细胞对靶细胞的杀伤活性与其细胞表面的受体和靶细胞表面的配体密切相关。NK细胞表面的抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Inhibitorykillercellimmunoglob

5、ulinlikereceptor,iKIR)与靶细胞表面特定的HLAI类分子结合可以明显抑制NK细胞的活性，靶细胞缺乏iKIR特定的配体将激发NK细胞对其杀伤活性1。NKG2D为NK细胞的活化性受体，表达于所有的NK细胞表面，是介导NK细胞识别和溶解肿瘤细胞的主要活化性受体。NKG2D的配体为MHCI类链相关基因产物(MICA、MICB)及ULBPS(人巨细胞病毒UL16蛋白的结合蛋白ULBP1、ULBP2、ULBP3)，NKG2D的配体在多种肿瘤细胞表达，其在鼻咽癌细胞的表达尚未见报道。本研究主要探讨鼻咽癌E2细胞株HLAI类分子表型和NKG2D配体的表达情况，进一步了解其对同种异

6、体NK细胞杀伤活性的影响。1材料和方法1.1材料NK细胞分离缓冲液（磷酸盐缓冲液，pH7.2，含0.5%BSA和2mMEDTA）及CD56MicroBeads（MiltenyiBiotec公司），FITC标记的山羊抗小鼠IgG1（eBioscience公司），RPMI1640(Gibco公司)，淋巴细胞分离液（上海试剂二厂），rhIL2(上海华新公司)，NK细胞杀伤活性检测试剂盒(CytoTox96NonRadioactiveCytotoxocityAssay，Promega公司)，KIRPCRSSP分型试剂盒(Dynal公司)，PCRSSPA、B、Cl青霉素和100μg/ml链霉

7、素的RPMI1640。培养NK细胞时加入1000U/ml的rhIL2。1.2.3K562、E2细胞表面NKG2D主要活化性配体的测定收集对数期生长的K562、E2细胞，PBS洗涤后，计数细胞，分管，按1μg/106细胞浓度分别加入AMO1、BMO1、M295、M310、M551，4℃孵育30min，PBS洗涤3次，以FITC标记的山羊抗鼠IgG1二抗4℃孵育30min，PBS洗涤，同型IgG1(Phar