蛋白酶体抑制剂mg132对pc12细胞的增殖抑制作用

蛋白酶体抑制剂mg132对pc12细胞的增殖抑制作用

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1、蛋白酶体抑制剂MG132对PC12细胞的增殖抑制作用:蔡同建,陈景元,李妍,季爱玲,杜可军,骆文静【关键词】蛋白酶体抑制剂;PC12细胞;帕金森病;细胞凋亡【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectofproteasomeinhibitorMG132ontheproliferationandapoptosisofdopaminergicPC12cells.METHODS:PC12cellssastainingandfloetry.RESULTS:Treatedforasam

2、eperiod(3d),theinhibitoryeffectofMG132onPC12cellproliferationenhancedentoftheconcentrationofMG132(0,1,2.5,5,10,20μmol/L).Theinhibitoryrateexceeded40%ol/L,andthe50%inhibitingconcentration(IC50)ol/L.MG132alsoinducedtheapoptosisofPC12cellsobviously.Theapopt

3、osisindexofthecellstreatedbyMG132at2.5μmol/Lfor3dinedbyGiemsastainingand25.6%byfloetry,thatofthecontrolcellsinergicPC12cellsandleadtoapoptosis.Thedisfunctionofproteasomemaydoharmtotheexistenceofdopaminergiccells.【Keyeinhibitor;PC12cells;Parkinsondisease;

4、apoptosis【摘要】目的:了解蛋白酶体抑制剂MG132对多巴胺能细胞PC12增殖和凋亡的影响.方法:用不同浓度的MG132处理PC12细胞3d,通过3(4,5二甲基噻唑2)2,5二苯基四氮唑溴盐(MTT)微量比色法检测MG132对PC12细胞增殖的影响,通过姬姆萨染色法和流式细胞术检测MG132对PC12细胞凋亡的影响.结果:在作用时间相同(3d)的条件下,随着MG132浓度的增高(0,1,2.5,5,10,20μmol/L),对PC12细胞增殖的抑制作用逐渐增强.当MG132浓度达到2.5μmo

5、l/L时,对PC12细胞的抑制率超过40%,IC50=3.78μmol/L.同时,MG132能够明显诱导PC12细胞凋亡:姬姆萨染色显示,浓度为2.5μmol/L的MG132作用3d,细胞凋亡率为24.7%,而对照为1.3%;流式细胞术分析结果表明,浓度为2.5μmol/L的MG132作用3d,细胞凋亡率为25.6%,而对照为0%.结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够抑制多巴胺能细胞PC12的增殖并诱导细胞凋亡,蛋白酶体活性的丧失可能影响到多巴胺能细胞的生存.【关键词】蛋白酶体抑制剂;PC12细胞;帕金森

6、病;细胞凋亡0引言帕金森病(parkinsonsdisease,PD)是最常见的神经系统退行性疾病之一,严重危害患者身体健康和降低患者的生活质量[1-2].PD的病因和发病机制至今不够明确.越来越多的证据表明,多巴胺能神经元内蛋白质的损伤和功能异常蛋白的蓄积在散发性PD的发病过程中起着重要的作用[3].蛋白酶体是一种多价复合酶,分布于细胞质与细胞核内,是哺乳动物细胞中主要的中性蛋白水解酶,在泛素蛋白酶体通路(ubiquitinproteasomepatha公司);6孔培养板(丹麦NUNC公司);NU25

7、00E型CO2孵箱(英国FormaScientif公司);酶联免疫检测仪(江苏国营华东电子管厂).1.2方法1.2.1PC12细胞的培养与传代细胞在加入100mL/L小牛血清,100U/mL青霉素的DMEM培养液中,37℃,50mL/LCO2常规培养.待细胞长满至培养瓶底面积80%之后传代.1.2.2细胞毒性试验(MTT法)取对数生长期的细胞,接种于96孔板中.第2日换含有MG1320,1,2.5,5,10和20μmol/L的培养液,继续培养3d,加入MTT(5g/L,20μL/孔),继续培养4h,终止

8、培养,小心吸弃培养孔内上清液,每孔加入150μL的二甲基亚砜(DMSO),振荡摇匀,使MTT产生的蓝色结晶充分溶解,在酶标仪上以波长490nm测定各孔A值.细胞增殖抑制率按照下式进行计算(对照组为0剂量组,实验组为不同浓度MG132作用组):IR(%)=(A对照组-A实验组)/A对照组×100.1.2.3姬姆萨染色法观察取对数生长期的细胞,常规爬片.24h以后,分别以正常培养液和加入MG1322.5μmol/L的培养液继续培养3d,然后进行

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