蜈蚣多糖对hela细胞的增殖抑制作用研究

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1、蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究李兴暖　韩雅莉　余卫国【摘要】目的研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制。方法用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用；流式细胞仪和AnnexinV-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响。结果在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖，改变Hela细胞的细胞周期，使细胞阻滞于G2/M期，并能诱导细胞凋亡。结论蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期，诱导细胞凋亡，从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作

2、用。【关键词】蜈蚣多糖；细胞周期；细胞凋亡　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectsofpolysaccharidefromScolopendrasubspinipesmutilans(PSSM)onHelacellsanditsmechanism.MethodsMTTassayetryandAnnexinV-FITC/PIfluorescencestaining.ResultsPSSMcouldobviouslyinhibittheproliferati

3、onofHelacellsatspecificconcentrationrange,changethecellcycleofHelacellsandblockHelacellsatG2/Mphase,andinducecellapoptosis.ConclusionPSSMcaninhibitthegroScolopendrasubspinipesmutilans;Cellcycle;Cellapoptosis　　少棘蜈蚣ScolopendrasubspinipesmutilansL.Koch又名百足,属节肢动物门，多

4、足纲，唇足目，螟蚣科动物，为《中国药典》记载的正品药材，为我国传统的镇痉、通络类药物。祖国医学记载和临床实践均已证明其具有镇静熄风、通络止痛、解毒散结等药用功效〔1〕。现代药理实验也证明了蜈蚣具有抗肿瘤和抗动脉粥样硬化等作用〔2,3〕，临床用于治疗肿瘤以及心脑血管病等症。传统中药均以整虫入药，但蜈蚣体内成分复杂，且有效成分尚不明了，无法对其药理作用做进一步研究。为了探讨蜈蚣抗肿瘤作用，本文以少棘蜈蚣为原料，对其体内多糖进行了分离纯化，并进一步对其进行了Hela细胞增殖的作用的研究，为进一步探索蜈蚣抑瘤作用机制奠定基础。

5、　　1材料　　1.1材料　　少棘蜈蚣ScolopendrasubspinipesmutilansL.Koch购自汕头市恒青药店，由广东工业大学生药研究室对其进行种类鉴定。人宫颈癌Hela细胞，由汕头大学医学院分子病理实验室提供，微血管内皮细胞MVEC，由汕头大学多学科研究中心提供。　　1.2试剂与仪器　　DEAE-52为TT）、碘化丙啶（PI）均购自Sigma公司；AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司；新生牛血清购自杭州四季青生物有限公司。ThermoLabsystems酶标仪（T

6、hermo公司）；ShelLab二氧化碳培养箱；EpicsXL流式细胞仪（BackmanCoulter公司）；倒置显微镜、荧光显微镜（Olympus公司）；NikonCoolpix4500数码相机。　　2方法　　2.1蜈蚣多糖(polysaccharidesfromScolopendrasubspinipesmutilansL.Koch,SSP)的制备少棘蜈蚣87g研钵磨碎，加入1000ml蒸馏水90℃恒温水浴搅拌4h，过滤，残渣加入500ml蒸馏水，重复上述步骤，过滤，合并滤液，浓缩滤液。取上清液，加5倍体积95％乙

7、醇4℃静置过夜，离心，去上清液，沉淀用少许蒸馏水溶解。Sevag法去蛋白数次〔4〕，将去蛋白溶液透析干燥，过DEAE-52离子交换纤维素色谱柱，以0.05，0.1，0.2，0.4和1mol·L-1NaCl进行阶段洗脱，共得到3个糖峰，其中浓度0.05mol·L-1的NaCl洗脱峰糖含量最高，收集此组分透析干燥，待用。　　2.2Hela和人微血管内皮细胞(Humanmicrovascularendothelialcell,MVEC)的培养取对数生长期的Hela和MVEC细胞接种于含10％小牛血清的1640培养基中，接种浓

8、度为5×105个/ml，置37℃，5％CO2浓度，饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养24h。去原培养基，加入含有SSP浓度分别为0，0.5，1，1.5，2，4μg/ml的维持液（含1.5％小牛血清的1640培养基），置培养箱中继续培养24h和48h后进行实验。　　2.3蜈蚣多糖（SSP）对Hela细胞增殖的影响取对数生长期Hela细胞