刺参黏多糖对hela细胞增殖分化的影响论文

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1、刺参黏多糖对Hela细胞增殖分化的影响论文【摘要】目的了解刺参酸性黏多糖（SJAMP）对Hela细胞增殖、分化的影响及其机制。方法体外培养Hela细胞，通过MTT法观察SJAMP对Hela细胞增殖的作用，电镜观察SJAMP作用下Hela细胞超微结构的变化，RTPCR法检测Hela细胞CyclinD1、CDK4、Cmyc的mRNA的表达。结果SJAMP能够有效抑制Hela细胞的增殖，并且具有剂量和时间依赖关系。透射电镜观察显示，SJAMP可诱导细胞向成熟细胞分化；SJAMP可以明显降低CyclinD1、CDK4、Cmy

2、c的mRNA表达。结论SJAMP可能是通过抑制细胞周期因子CyclinD1和CDK4的表达而抑制细胞增殖，通过抑制癌基因Cmyc的表达来诱导Hela细胞分化。【关键词】刺参葡糖氨基聚糖类Hela细胞细胞增殖细胞分化［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectofStichopusjaponicusacidicmucopolysaccharide(SJAMP)onproliferationanddifferentiationofHelacellsanditscorrespondingm

3、echanism.MethodsHelacellsicroscope.CyclinD1,CDK4,CmycmRNAexpressionsinedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).ResultsAninhibitoryeffectofSJAMPedependentmanner.Electronmicroscopyobservationshootedcellsdifferentiation.SJAMPdecreasedthemRNAexpressio

4、nsofCyclinD1,CDK4andCmycgenes.ConclusionSJAMPmightinhibittheproliferationofHelacellsviadecreasingtheexpressionsofCyclinD1,CDK4,andinductthedifferentiationofHelacellsviadecreasingtheexpressionsofCmycgene.［KEYP)是由刺参体壁提取的一种动物酸性黏多糖1。经药理实验结果证明，SJAMP具有广谱抗肿瘤、抗凝血及增强机体免疫

5、功能等活性2,3.freelega公司产品；TaqDNA聚合酶，上海中科开瑞生物芯片科技股份有限公司产品；DNAMarker、Marker2000，Takara公司产品。BNP310恒温CO2培养箱，日本TABAIESOEC公司；PCR仪，Biometra公司；EAR400AT酶标仪，奥地利；JEM扫描电镜，日本JEOL公司；ViDAS21图像分析系统，德国欧波同公司；天能凝胶图像分析系统，上海天能科技公司。1.2方法1.2.1细胞培养Hela细胞常规培养于含有体积分数0.10胎牛血清，100kU/L青霉素和100mg/

6、L链霉素的DMEM培养基中，置于37℃，体积分数0.05的CO2培养箱中培养。1.2.2SJAMP对Hela细胞增殖的作用观察采用MTT法。取指数生长期细胞加消化液消化制成单细胞悬液，计数、调整细胞浓度为1×107/L，取上述细胞悬液接种于96孔板，每孔200μL。每组做6个平行样品。37℃，体积分数0.05的CO2孵育过夜，使细胞贴壁生长。第2天换含不同浓度SJAMP（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0g/L）的培养液，对照组换不含SJAMP的培养液，均置37℃，体积分数为0.05的CO2孵育。药物作用3d后，加入5

7、g/L的MTT20mL，37℃孵育4h，去掉上清液，采用细胞内形成的蓝色结晶溶解于150μLDMSO。酶联免疫检测仪测定570nm波长处各孔吸光度（A）值,按公式计算SJAMP对Hela细胞的抑制率。抑制率=(对照组A值-实验组A值)／对照组A值×100%。1.2.3不同浓度SJAMP作用后Hela细胞的形态结构变化观察用浓度为0.8、1.2和1.6g/L的SJAMP培养液分别在细胞培养瓶中作用于Hela细胞1、3、5d，对照组Hela细胞正常生长1、3、5d，在相应时间点倒掉培养液，分别使用DHanks液冲洗3次，光学

8、显微镜下观察细胞形态的变化。再将SJAMP处理过的Hela细胞收集、常规消化离心后，经固定、脱水、包埋、固化、染色、切片等处理，在JEM1200EX透射电镜下观察。1.2.4SJAMP对Hela细胞CyclinD1、CDK4和Cmyc的mRNA表达影响采用RTPCR法检测。以βactin作为内参