刺参黏多糖对hela细胞增殖分化的影响

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1、刺参黏多糖对Hela细胞增殖分化的影响【关键词】刺参葡糖氨基聚糖类Hela细胞细胞增殖细胞分化　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectofStichopusjaponicusacidicmucopolysaccharide(SJAMP)onproliferationanddifferentiationofHelacellsanditscorrespondingmechanism.MethodsHelacellsicroscope.CyclinD1,CDK4,CmycmRNAexpressio

2、nsinedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).ResultsAninhibitoryeffectofSJAMPedependentmanner.Electronmicroscopyobservationshootedcellsdifferentiation.SJAMPdecreasedthemRNAexpressionsofCyclinD1,CDK4andCmycgenes.ConclusionSJAMPmightinhibittheproliferationo

3、fHelacellsviadecreasingtheexpressionsofCyclinD1,CDK4,andinductthedifferentiationofHelacellsviadecreasingtheexpressionsofCmycgene.　　［KEYP)是由刺参体壁提取的一种动物酸性黏多糖[1]。经药理实验结果证明，SJAMP具有广谱抗肿瘤、抗凝血及增强机体免疫功能等活性[2,3]，特别是其抗肿瘤作用日益受到重视。王振立等[4]研究结果显示，SJAMP可明显抑制肿瘤细胞DNA的合成从而抑制肿瘤生长，而对正常细胞的DN

4、A合成有明显促进作用，这有利于正常细胞的增殖，表明SJAMP对肿瘤细胞及正常细胞具有一定的选择性作用。本实验选择人宫颈癌细胞Hela系作为研究对象，探讨了SJAMP对Hela细胞增殖、分化的作用及其可能的作用机制。　　1材料和方法　　1.1材料　　人宫颈癌细胞Hela系，青岛大学医学院微生物学实验室赠；SJAMP，中国海洋大学医药学院提取，相对分子质量122248，纯度99.5%；DMEM培养基、胰蛋白酶，GIBCO公司产品；胎牛血清，杭州四季青公司产品；TRIzol试剂，GIBCO公司产品；反转录试剂盒，Promega公司产品；TaqD

5、NA聚合酶，上海中科开瑞生物芯片科技股份有限公司产品；DNAMarker、Marker2000，Takara公司产品。BNP310恒温CO2培养箱，日本TABAIESOEC公司；PCR仪，Biometra公司；EAR400AT酶标仪，奥地利；JEM扫描电镜，日本JEOL公司；ViDAS21图像分析系统，德国欧波同公司；天能凝胶图像分析系统，上海天能科技公司。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养Hela细胞常规培养于含有体积分数0.10胎牛血清，100kU/L青霉素和100mg/L链霉素的DMEM培养基中，置于37℃，体积分数0.05的C

6、O2培养箱中培养。　　1.2.2SJAMP对Hela细胞增殖的作用观察采用MTT法。取指数生长期细胞加消化液消化制成单细胞悬液，计数、调整细胞浓度为1×107/L，取上述细胞悬液接种于96孔板，每孔200μL。每组做6个平行样品。37℃，体积分数0.05的CO2孵育过夜，使细胞贴壁生长。第2天换含不同浓度SJAMP（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0g/L）的培养液，对照组换不含SJAMP的培养液，均置37℃，体积分数为0.05的CO2孵育。药物作用3d后，加入5g/L的MTT20mL，37℃孵育4h，去掉上清液，采用细胞内形成的蓝色

7、结晶溶解于150μLDMSO。酶联免疫检测仪测定570nm波长处各孔吸光度（A）值,按公式计算SJAMP对Hela细胞的抑制率。抑制率=(对照组A值-实验组A值)／对照组A值×100%。　　1.2.3不同浓度SJAMP作用后Hela细胞的形态结构变化观察用浓度为0.8、1.2和1.6g/L的SJAMP培养液分别在细胞培养瓶中作用于Hela细胞1、3、5d，对照组Hela细胞正常生长1、3、5d，在相应时间点倒掉培养液，分别使用DHanks液冲洗3次，光学显微镜下观察细胞形态的变化。再将SJAMP处理过的Hela细胞收集、常规消化离心后，

8、经固定、脱水、包埋、固化、染色、切片等处理，在JEM1200EX透射电镜下观察。　　1.2.4SJAMP对Hela细胞CyclinD1、CDK4和Cmyc的mRNA表达影响采用RTPCR