激活的吲哚乙酸对hela细胞增殖及mda水平的影响

《激活的吲哚乙酸对hela细胞增殖及mda水平的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、激活的吲哚乙酸对HeLa细胞增殖及MDA水平的影响：周芙玲，黄辰，宋土生，倪磊，王爱英，牛月英，李明众【关键词】辣根过氧化物酶　　【Abstract】AIM:Toevaluatetheeffectsofindole3aceticacid（IAA）oxidatedbyhorseradishperoxidase（HRP）ontheproliferationandmalondialdehyde（MDA）levelofHeLacells.METHODS:HeLacellsol/LandHRP1.2mg/L）at

2、varioustimepoints.Theinhibitionofproliferationactivity,colonyformingrate,proliferationindex,apoptosisrate,MDAlevelandmorphologicalchangeofHeLacellseansoftrypanbluedye,MTTreductionassay,colonyformingassay,floetry,TBAtestandQTTinHeLacells.ThecellcycleofHeL

3、acellsaffectedbyHRP/IAAberoftheHeLacellsinG0/G1stagesberoftheHeLacellsslightlyinSandG2/Mstages.Colonyformingrateandproteinreducedremarkablyorphologyalondialdehyde，MDA)水平的影响.方法：取不同处理时间点体外培养的人宫颈癌HeLa细胞，经不同终浓度的IAA（分别为20，40，60，80，100μmol/L）和同一终浓度的1.2mg/LHRP共

4、同处理后，依次用台盼蓝拒染法、生长抑制实验、集落形成实验、流式细胞术、TBA法及QDA含量，观察细胞形态学变化.结果：HRP激活的IAA对HeLa细胞生长及降解MTT的能力均有较强的抑制作用，在一定的浓度范围内，呈现明显的时效和量效关系.在6,24,48和72h检测细胞周期，处理组随着IAA浓度增加，细胞凋亡率增加，S期和Ｇ2/Ｍ期细胞比率增加，Ｇ0/Ｇ1期细胞比率下降.随着IAA浓度的增加，HeLa细胞集落生成率逐渐减少，集落体积变小,各处理组蛋白含量显著降低，MDA含量增加，细胞形态学的变化在72h

5、最明显.结论：HRP激活的IAA可能通过促进细胞进入分裂期，同时加速脂质过氧化程度的机制来诱导HeLa细胞凋亡.　　【关键词】吲哚乙酸；　辣根过氧化物酶；　HeLa细胞；增殖；丙二醛；凋亡　　0引言　　吲哚乙酸（indoleaceticacid，IAA）是高等植物体内最常见的生长激素，能够影响植物细胞的生长、分裂及分化等［1］.辣根过氧化物酶（horseradishperoxidaseHRP）有助于激活IAA产生细胞毒性，从而具有杀灭癌细胞的能力［1，2］.我们以HeLa细胞为模型，探讨HRP激活IAA

6、后的生物学效应及对脂质过氧化程度的影响，为进一步研制IAA抗肿瘤药物奠定基础.　　1材料和方法　　1.1材料　　主要试剂和仪器:HeLa细胞株购自中科院上海细胞所.RPMI1640干粉培养基为美国Gibco公司产品；新生牛血清为杭州四季青公司产品；四甲基偶氮唑盐(MTT)和碘化丙啶（PI）为Sigma公司产品；二甲基亚砜(DMSO)为Amresco公司产品；IAA由上海生化试剂公司提供，4℃保存，临用时用培养液稀释至所需浓度.考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒和丙二醛（MDA）检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所

7、.德国BMGLabtechnologies公司的高功能多通量微板测试系统；美国BD公司的流式细胞仪FACSCalibur；德国Leica公司的QPI1640基础培养液中加入100mL/L的新生牛血清，1×105u/L青霉素，100mg/L链霉素，HeLa细胞株接种在RMPI1640培养液中，置于CO2孵箱（37℃，50mL/L）中培养，3～4d传代1次，取对数生长期细胞用于实验.　　1.2.2生长曲线的测定空白对照A组为正常生长HeLa细胞；对照B组HeLa细胞单独加入的IAA终浓度20μmol/L；对

8、照X1组HeLa细胞单独加入的HRP终浓度1.2mg/L.实验组X2，X3，X4，X5及X6中IAA的终浓度分别为20，40，60，80，100μmol/L，HRP终浓度1.2mg/L，用于激活IAA产生细胞毒性.HeLa细胞2×105个接种于24孔板中，总体积1mL.共记数4日，每日取3孔细胞用4g/L台盼蓝拒染法计活细胞数，绘制细胞生长曲线.　　1.2.3生长抑制实验(MTT法)HeLa细胞2×104个接种于96孔板中，加入不同终浓度I