大鼠胃壁细胞的分离及培养

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1、大鼠胃壁细胞的分离及培养关键词:胃壁细胞;细胞分离;细胞培养摘要:目的完成胃壁细胞分离及纯化，建立原代培养胃壁细胞的方法.方法制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育，并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞，Percoll梯度离心富集胃壁细胞，用含100mL・L-1血清的PBS或培养液，时差贴壁去除成纤维细胞，然后，将壁细胞接种于培养板中，培养液用无血清的1∶1Harm’sF-12/DMEM培养，内含胰岛素5mg・L-1，氢化可地松4μg・L-1，转铁蛋白5mg・L-1，硒酸钠5μg・L-1，牛血清白

2、蛋白2g・L-1，表皮生长因子25μg・L-1，葡萄糖1.98g・L-1持续培养可达1odelofisolationand　primarycultureinvitroforfurtherstudy.METHODSThestomachsofratssacsucosafacingoutina.ThestomachsL・L-1O2and50mL・L-1CO2at37℃for60min，thenstirredatroomtemperatureandthedispersedcellsovaloffibroblasts，thecell

3、sL・L-1fetalbovineserumFBSandpreattachedinflaskscoatedin.Therichparietalcellsaintainedin1∶1Ham’sF-12/DMEMcontainedinsulin5mg・L-1，hy-drocortaison4μg・L-1，tranferrin5mg・L-1，sodiumselen-ite5μg・L-1，BSA2g・L-1，epidermalgro-freemediaandsurvivedforoveroneethodsandcon

4、ditionaresuitablefortheisolationandprimarycultureofratgastricparietalcells.　　0引言　　胃粘膜的壁细胞属于高度特异分化的终末细胞，主要功能是分泌胃酸和内因子，其分离和培养均较困难，到目前为止，大鼠胃壁细胞的分离和培养方法在国内均未见报道，我们在对大鼠胃粘膜壁细胞分离和原代培养的工作中获得了一些经验和体会.　　1材料和方法　　1.1材料选3’sF-12/DMEM，表皮生长因子、转铁蛋白购自Gibco公司，硒酸钠、胰岛素、氢化可地松均来自Sigma公司，Pecoll购自Pharmacia公司，二硫苏糖（dithiothr

5、eitol，DTT）购自原平皓生物技术公司，牛血清白蛋、EDTA购自华美公司.胎牛血清、HEPES购自Hycolne公司，吖啶橙购自基因公司.　　1.2方法　　1.2.1壁细胞分离及培养所需液体MediumA:NaH2PO40.5mmol・L-1，Na2HPO41mmol・L-1，NaHCO320mmol・L-1，NaCl80mmol・L-1，KCl5mmol・L-1，HEPSE50mmol・L-1，glucose11mmol・L-1，BSA10g・L-1，EDTA2mmol

6、2539;L-1，pH7.4;MediumB:A组中去EDTA，加CaCl21mmol・L-1，MgCl21.5mmol・L-1;MediumC:A组中去EDTA，加CaCl21mmol・L-1，MgCl21.5mmol・L-1，DTT1mmol・L-1;消化液:用MdeiumA配制，链霉蛋白酶浓度为1g・L-1，基础培养液:Ham’sF-12/DMEM（1∶1Gibco），按要求加入NaHCO3，调pH在7.1～7.3，过滤除菌，分装备用.完全培养液:在基础培养液的基础上加入其他辅成分:胰岛素5mg

7、539;L-1，氢化可地松4μg・L-1，转铁蛋白5mg・L-1，硒酸钠5μg・L-1，牛血清白蛋白2g・L-1，表皮生长因子25μg・L-1，葡萄糖1.98g・L-1和庆大霉素5mg・L-1.Percoll贮备液为10×PBS，上述液体均过滤除菌，分装备用.　　1.2.2大鼠胃粘膜壁细胞的分离及原代培养根据Ch