大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定

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1、万方数据医学研究杂志2013年5月第42卷第5期·论善·————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一一大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定姚灿郏舜杰陈海啸洪盾朱敏范厉龙吕海燕摘要目的建立一套简单易行有效的骨髓间充质干细胞(BMscs)的培养、纯化、鉴定的方案，初步了解BMSCs的基本性状和功能特点。方法取4周龄雄性sD大鼠，全骨髓贴壁培养BMscs，对细胞相关的性状进行观察及分析，流式鉴定表面抗原，诱导其成骨

2、、成脂分化，并进行染色鉴定等。结果流式检测结果cD29、cD90呈阳性反应，cD34、cD45呈阴性反应，成骨诱导分化后茜素红染色呈阳性反应，成脂诱导分化后油红染色呈阳性反应。结论全骨髓培养法是一种相对简单易行的BMSCs分离纯化的方法，可获得纯度高，活性好，性状均～的BMScs。关键词骨髓间充质干细胞原代培养分化s鉴定Isolation。cultureandldentificationofBoneMesenchymaIstemcellsofsDRatsinvitro．y口oCn凡，，iⅡJs^u强一e，C矗enHo血ido，^ro，tgDMn，e￡口f．7h如^ouH

3、ospi￡Ⅱf／坳fio￡ed￡DIF0，lz^ou肘ed站ozCoZZ89e，Z^E一口，蟛，J7DD0，c^i凡oAbstractObjectiveToestablishanefkctivemethodtocultivateandidentifyBMSCs，andtohaveapreliminaryunderstandingofthecharacteris“csoftheBMSCs．MethodsRatbonemarrowmesenchymalstemcellsoffourweeksoldSprague—Dawleywereinvitroi—solatedbywho

4、lebonemarrowadherencemethod．Cellmorphologywasobsenred，andexpressionsofCD34，CD45，CD29，CD90cellfactorswereexaminedbyflowcyt。metryanddifferentiationabilitywasdetectedt。identifywhetherit’stheBMSCs．ResultsCellsappearedspindle—shapedandshowedcharacteris“cswirlinggrowth．ThesuIfacemarkerCD34，CD4

5、5werenegative，CD90，CD29werepositive．After0steogenicandAdipogenicdifferentiation，Alizarinredand0ilRedstainingwaspositive．ConclusionWesuccessfullyIsoIatedthebonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)bythewholebonemarrowculturemethod，andfoundthatcellshadh培hpurityandgoodactivitywithin8thgeneratio

6、n．Thewholebonemarrowculturewaseffctiveandeasy．KeywordsBMSC；P“maryculture；Differentiation；ldentifica“on骨髓间充质干细胞(BMSCs)是起源于骨髓支持结构的一群成体干细胞，具有自我更新、多向分化潜能。BMSCs在不同的诱导环境中可分化为骨细胞、成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、肌肉细胞、肝细胞样细胞、脂肪细胞等多种组织细胞，且BM．scs具有低免疫原性，成为组织工程首选种子细胞‘1’“。本研究应用全骨髓贴壁法，利用该细胞的黏附特性，贴壁分离BMSCs，传代并鉴定，

7、建立一种较为简单、有效的BMsCs的培养方法，为本项目的进一步研究打下良好的基础。材料与方法1．材料：(1)实验动物：4周龄雌性SPF级sD大鼠(购于浙江省医学科学院)。(2)实验试剂：75％乙醇、PBs(Hy—e10ne)、MEM一仪培养基(Gibco)、胎牛血清(Hyclone)、胰蛋白酶(Gibco)、成骨诱导液(cYAGEN)、成脂诱导液(cYAGEN)、CD29(BD)、CD45(BD)、cD90(BD)、cD34(santacruz)、MTS(Promega)。(3)实验设备：无菌手术器械，移液器(Eppen．基金项目：国家自