大鼠胃壁细胞的分离及培养论文

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1、大鼠胃壁细胞的分离及培养论文.freelLL-1血清的PBS或培养液，时差贴壁去除成纤维细胞，然后，将壁细胞接种于培养板中.freel’sF-12/DMEM培养，内含胰岛素5mgL-1，氢化可地松4μgL-1，转铁蛋白5mgL-1，硒酸钠5μgL-1，牛血清白蛋白2gL-1，表皮生长因子25μgL-1，葡萄糖1.98gL-1持续培养可达1odelofisolationandprimarycultureinvitroforfurtherstudy.METHODSThestomachsofratssacsucosafacingoutina.Thestomac

2、hsLL-1O2and50mLL-1CO2at37℃for60min，thenstirredatroomtemperatureandthedispersedcellsovaloffibroblasts，thecellsLL-1fetalbovineserumFBSandpreattachedinflaskscoatedin.Therichparietalcellsaintainedin1∶1Ham’sF-12/DMEMcontainedinsulin5mgL-1，hy-drocortaison4μgL-1，tranferrin5mgL-1，sodiums

3、elen-ite5μgL-1，BSA2gL-1，epidermalgro-freemediaandsurvivedforoveroneethodsandconditionaresuitablefortheisolationandprimarycultureofratgastricparietalcells.0引言胃粘膜的壁细胞属于高度特异分化的终末细胞，主要功能是分泌胃酸和内因子，其分离和培养均较困难，到目前为止，大鼠胃壁细胞的分离和培养方法在国内均未见报道，我们在对大鼠胃粘膜壁细胞分离和原代培养的工作中获得了一些经验和体会.1材料和方法1.1材料选3’

4、sF-12/DMEM，表皮生长因子、转铁蛋白购自Gibco公司，硒酸钠、胰岛素、氢化可地松均来自Sigma公司，Pecoll购自Pharmacia公司，二硫苏糖（dithiothreitol，DTT）购自原平皓生物技术公司，牛血清白蛋、EDTA购自华美公司.胎牛血清、HEPES购自Hycolne公司，吖啶橙购自基因公司.1.2方法1.2.1壁细胞分离及培养所需液体MediumA:NaH2PO40.5mmolL-1，Na2HPO41mmolL-1，NaHCO320mmolL-1，NaCl80mmolL-1，KCl5mmolL-1，HEPSE50mmolL-

5、1，glucose11mmolL-1，BSA10gL-1，EDTA2mmolL-1，pH7.4;MediumB:A组中去EDTA，加CaCl21mmolL-1，MgCl21.5mmolL-1;MediumC:A组中去EDTA，加CaCl21mmolL-1，MgCl21.5mmolL-1，DTT1mmolL-1;消化液:用MdeiumA配制，链霉蛋白酶浓度为1gL-1，基础培养液:Ham’sF-12/DMEM（1∶1Gibco），按要求加入NaHCO3，调pH在7.1～7.3，过滤除菌，分装备用.完全培养液:在基础培养液的基础上加入其他辅成分:胰岛素5mg

6、L-1，氢化可地松4μgL-1，转铁蛋白5mgL-1，硒酸钠5μgL-1，牛血清白蛋白2gL-1，表皮生长因子25μgL-1，葡萄糖1.98gL-1和庆大霉素5mgL-1.Percoll贮备液为10×PBS，上述液体均过滤除菌，分装备用.1.2.2大鼠胃粘膜壁细胞的分离及原代培养根据Cheng等［1］和Prinz等［2］的方法并略有改进，取非禁食雄性SD大鼠，体质量在100g左右，脱颈处死并剖腹取胃，立即放入冰冷的Hanks液中，在胃底作一约1.0cm小切口，用玻璃棒将胃翻转，使胃粘膜面朝外而浆膜面向内，用Hanks液洗去胃液膜面的食物残渣和血迹.在胃幽

7、门部结扎，并经胃底部的切口注消化酶，每胃约2.0～2.5mL，注满为止.然后，结扎胃底部.将翻转胃囊放入MediumA中，每个囊约10mL，置于37℃消化60min，水浴振荡150次min-1，每20min换一次新鲜的MediumA，整个过程皆充以950mLL-1O2和50mLL-1CO2.待消化结束后，把胃囊放入MecliumB中，在室温下用磁力搅拌器轻轻搅拌60min，每15min收集1次细胞，过200目筛网，离心1000rmin-15min，沉淀用MediumC洗涤2次，每次离心1000rmin-1，5min，并用无血清的完全培养液置成细胞悬液.然

8、后综合Schepp等［3］的方法，并稍有改进，采用不连续分别配制40%和60%的