大鼠脂肪干细胞分离培养及细胞表型的研究-论文.pdf

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1、海南医学2014年5月第25卷第9期HainanMedJ，May2014，Vo1．25，No．9doi：10．3969／j．issn．1003—6350．2014．09．0488·论大鼠脂肪干细胞分离培养及细胞表型的研究吕春燕，陈高莉，杨玲，陈昌金，袁慧，杨雪梅(1．成都市第五人民医院病理科，四川成都611130；2．成都中医药大学附属医院检验科，四川成都610072；3．成都中医药大学附属医院中心实验室，四川成都610072【摘要】目的分离、培养和冻存大鼠脂肪干细胞，并对其相关的细胞表型进行研究，为利用脂肪干细胞

2、治疗梗阻性肾病肾纤维化等实验提供依据。方法取大鼠3只，经消毒麻醉，采集其腹股沟处脂肪组织分离培养其中的脂肪干细胞，用相差倒置显微镜观察细胞生长方式及形态变化。取第三代细胞用流式细胞仪作细胞免疫表型的鉴定。冻存复苏后再次检测干细胞生长情况及表型。结果大鼠脂肪组织中含有大量间充质干细胞，原代培养的ASCs呈小圆形或星形，经传代后的脂肪干细胞形态比较均一，呈长梭形，个别略呈多角形、漩涡样生长。其细胞表型为CDCD高表达，CD，、CD。中等程度表达，CD极低表达。脂肪干细胞经低温冻存3个月，复苏后，生长活力和存活率与冻存前

3、未见明显区别，CD和CD检测与冻存前表达率也一致。结论建立了一种脂肪干细胞的有效分离、培养及保存方法，并对其表面标志物进行鉴定，为利用脂肪干细胞进行进一步的实验研究提供了依据。【关键词】脂肪干细胞；细胞培养；表面标志物；鉴定；冻存【中图分类号】R-332【文献标识码】A【文章编号】loo3—635O(2O14)O9—1256—o4Isolation，cultivation，identifyandcryopreservationofmesenchymalstemcellsfromratadiposetissue／nv

4、itro．LVChun-yan1，CHENG∞一H2YANGLing2CHENChang—3，YUANHui，YANGXne-mei．1．DepartmentofPathology,theFifthPeopleHospitalofChengdu,Chengdu611130,Sichuan,CHINA；2．DepartmentofLaboratory,AffiliatedHo~italtoChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610072,Sichu

5、an，CHINA；iCentralLaboratory,AffiliatedHospitaltoChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610072,Sichuan,CHINA【Abstract】ObjectiveTosearchamethodforisolation，cultivation，identificationandcryopreservationofmesenchymalstemcellsfromratadiposetissueinvit

6、ro．MethodThreeratswasanaesthetizedanddisinfectedCOIl-ventionally,theiringuinaladiposetissueweretakenandshearedtopaste．111efragmentsweredigestedbycollagenasetypeI．suspendedbyDMEM．andplantedinculturedish．Thenthecellswereculturedinincubatorculture．Theirfirstmediu

7、mchangehappenafter24—48hours，thenthechangeOCCUF2~3daysonceagain，after5～7daysand80％cellfu—sion，ceilsweredigestedbyTrypsinandpassagedbyEDTA．CellmicroscopywasusedtomorphologicalobservationandthetIlirdgenerationwasusedtoidentifybyflowcytometriccellcycle．ResultsRat

8、sfathadalargeamountofadipose—derivedmesenchymalstemcells(ADMSCs)．TheshapeofprimaryculturedASCswasastarormuchhorn；af．terpassageoftheASCsrelativelyuniformshape，fusiformshape，spiralgr