犬脂肪干细胞的分离培养与鉴定-论文.pdf

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1、34中国兽医杂志2014年(第5O卷)第5期ChineseJournalofVeterinaryMedicine犬脂肪干细胞的分离培养与鉴定黄奇，周露云，刘振兴。，王虹人，施振声，曾申明(1．中国农业大学动物医学院，北京海淀100193；2．中国农业大学动物科技学院，北京海淀100193)摘要：为了研究脂肪干细胞(Adipose—derivedstemcells，ASCs)体外培养方法及其生物学特性，将ASCs应用于小动物临床治疗，本试验用犬进行了脂肪干细胞的分离、培养和鉴定。犬脂肪干细胞(Canineadipose—derivedstemcells，cASCs)体外培养

2、生长良好，呈细长梭形。第3代(P3)细胞诱导2周后，成脂诱导组经油红O染色可见细胞内脂滴积累；成骨诱导组经碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，AKP)及VonKossa染色，AKP、钙结节均呈阳性表达。第3代至第5代(P3～P5)细胞流式细胞检测结果显示，所分离细胞稳定高表达间充质干细胞(MesenchymalStemCells，MSCs)标志CD29、CD44、CD90(>90％)，不表达造血细胞标志CD45(<2％)。培养结果显示，从犬镰状韧带和皮下脂肪均可分离出cASCs。cASCs取材方便，易于体外培养，多次传代及冻存对cASCs的生物学性质无明显

3、影响。cASCs有望成为国内动物医学临床研究和治疗的重要干细胞来源。关键词：犬；脂肪干细胞；分离；鉴定中图分类号：$858．292文献标志码：A文章编号：0529—6005(2014)05—0034—03Isolation．CultureandIdentificationofCanineAdipose—DerivedStemCellsHUANGQi，ZHOULu—yun，LIUZhen—xing2，WANGHong—ren，SHIZhen—sheng，ZENGShen—ming2(1．CollegeofVeterinaryMedicine，ChinaAgricultura

4、lUniversity，Beijing100193，China；2．CollegeofAnimalScienceandTechnology，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China)Abstract：ToverifythemethodofASCscultureinvitroandapplythismethodtotheclinicaltherapyofveterinarymedicine，ca—nineadiposetissueof6bitcheswasobtainedinovariohysterectomyforth

5、eisolation，cultureandidentificationof，ASCs．ASCsgrewwellinvitrowithspindle—likemorphology．Passage3cellswereanalyzedfortheircapacitytodifferentiateintoadipogenicandosteo—geniclineages．After2weeks，OilRedOstainwaspositiveinadipogenicdifferentiationmedium，andAKPandvonKossastainwerestronglyposi

6、tiveinosteogenicdifferentiationmedium．FlowcytometryshowedthatthemajorityofPassage3toPassage6ofcASCswerepositiveforthemesenchymalmarkersCD29，CD44，CD90(>90％)，anddidnotexprersthehematopoieticmarkerCD45(<2％)．ASCsweresuccessfullyisolatedfrombothfalciformligamentandsubcutaneousadiposetissue，and

7、thecellproliferationmayslowdownwiththeincreaseoftheageofadog．Inconclusion，cASCswereavailableandeasytoculture，afterseveralpassagesandthecryopreservationperiod，thecellsconservedtheirbiologicalprope~y．cASCsmayrepresentanimportantstemcellsourcebothforvet—erinarycellther