人精原干细胞分离_培养与鉴定

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1、·208·中华男科学杂志·论著·NationalJournalofAndrologyZhonghuaNanKeXueZaZhiNJA2015，21(3):208－213BasicＲesearchhttp://www．androl．cn(基础研究)人精原干细胞分离、培养与鉴定11112221王俊龙，杨施，田汝辉，朱子珏，郭英，袁青青，何祖平，李铮(上海交通大学医学院附属仁济医院，1．泌尿外科，2．临床干细胞中心，上海200127)【摘要】目的:分离、鉴定和培养人精原干细胞(SSC)，以获得纯化、富集的人SSC并为其研究与应用奠定

2、基础。方法:通过免疫荧光方法检测睾丸组织中CD90表达情况;应用两步酶消化和差速贴壁法分离人睾丸生精细胞，以CD90为人SSC标志，用免疫磁珠分选技术(MACS)对人睾丸生精细胞进行分选，并利用ＲT-PCＲ和免疫细胞++化学对分选所得CD90细胞进行鉴定;同时用SG培养液将CD90细胞与支持细胞进行体外共培养。结果:+MACS分选所得CD90细胞大小、形态特征较为均一，ＲT-PCＲ检测其表达人SSC标记性基因，免疫荧光检测其高表达人SSC特异标记GFＲA-1、GPＲ125和UCHL-1，阳性率达90．5%，其在SG培养液中与支

3、持细胞共培养14d后仍可保持良好活性。结论:CD90可作为人SSC特异性标志之一，结合差速贴壁和MACS可高效分选人SSC，分选所得SSC可在SG培养液中进行体外培养。【关键词】人精原干细胞;CD90;分离;鉴定;培养+*中图分类号:Ｒ698．2文献标志码:Adoi:10．13263/j．cnki．nja．2015．03．003Isolation，culture，andidentificationofhumanspermatogonialstemcells11112WANGJun-long，YANGShi，TIANＲu-hui

4、，ZHUZi-jue，GUOYing，221YUANQing-qing，HEZu-ping，LIZheng1．DepartmentofUrology，2．ClinicalＲesearchCenterforStemCells，ＲenJiHospital，SchoolofMedicine，Shang-haiJiaoTongUniversity，Shanghai200127，China【Abstract】Objective:Toisolate，identifyandculturehumanspermatogonialstemcell

5、s(SSC)andthenobtainpurifiedandenrichedhumanSSCsforresearchandapplication．Methods:WedetectedtheexpressionofCD90inthehumantestisusingtheim-munofluorescencetechniqueandisolatedhumantesticularspermatogeniccellsbytwo-stepenzymaticdigestion，followedbydifferentialplatingan

6、dmagnetic-activatedcellsorting(MACS)withCD90asanSSCmarker．ThenweidentifiedtheisolatedCD90-positivesper-matogeniccellsbyＲT-PCＲandimmunocytochemistry，andmeanwhilecoculturedthemwithSertolicellsinSGmediuminvitro．Ｒe-sults:TheisolatedCD90-positivecellsshowedarelativelyhom

7、ogeneouscharacteristicinsizeandmorphologyandexpressedthegenesspecificforhumanSSCs，withhighexpressions(90．5%)ofGFＲA1，GPＲ125，andUCHL1．AftercoculturewithSertolicellsintheSGmediumfor2weeks，theisolatedCD90-positivecellsmaintainedagoodactivity．Conclusion:CD90canberegarded

8、asaspeci-ficmarkerforhumanSSCsandusedtoobtainhighlyenrichedhumanSSCsbydifferentialplatingandMACS．Furthermore，theisolatedhumanSSCscanbecult