sd大鼠神经干细胞的分离培养与鉴定

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1、学术学位硕±学位论文单位代码：１０６７８分类号：Ｒ７４１学号：２０１２２４１密级；尾略Ｍ牛太常硕壬学位论文馨ＳＤ大鼠神经干细胞的分离培养与鉴定院一（系）、所昆明医科大学第临床医学院研究生姓名黄涛学科、专业外科学（神经外科）学位类型学术学位指导教师杨智勇教授二〇—五年五月尾巧ｉｌ料太常硕±学位论文ＳＤ大鼠神经干细胞的分离培养与鉴定研究生姓名黄涛学科、专业外科学（神经外科）申请学位类型学术学位指导教师杨智勇教授指导小组教师邓兴力副教授完成日期二〇—五年五月

2、：足咚ｓ钟常研究生学位论文研究撰写声明本人郑重声明：本学位论文是我本人在导师指导下，独立进行学位课题研究所取得的研究成果。论文中除特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含他人或其他机构己经发表或撰写过的研究成果。对本研巧和论文做过贡献的同道我均在论一文中作了明确的说明并表明谢意。该学位论文资料若有不实么处，本人愿承担切相关责任。＾学位论文作者（签名）；＾、％六？見咚Ｓ钟、寒研巧生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解昆明医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许ｉ

3、扛文被（查阅和借阅，。学校可公布论文的全部或部分内容确属保密内容己注明并在解＊＇密后遵守此规定）；学校可采用影印、缩印或其他手段保存本学位ｉ么文Ｉ学位论文作者（签名指导教师（签名－年月巧７卓巧Ｊ心（Ｊ用＾＂本人及导师同意将学位论文提交至清华大学中国学术期刊（光盎版）电子＂，并编入ＣＮＫＩ系列数据库杂志社进行电子和网络出版，传播本学位论文的全部或部分内容Ｉ同意按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享送相关权益ｆ。学位论文作者（签名指导教师（签名）：．；－—月飾月）背王钉本课题基金资助项目国家自然科学基金（

4、８１２４１１２６、８１３６０１９７）５南省教育厅科学研究基金（２０１３Ｊ０５７）目录１中：摘要Ａｂｓｔｒａｃｔ４符号说明７９引言１．機１１１１．１主要仪器设备１１２１．实验试剂及材料２１１３．３实验动物１１．４试剂配制３么施１５２１１５．神经干细胞的分离培养２丄１原代细胞的培养１５２丄２神经干细胞传代培养１６２丄３死活细胞的分离１７２丄４神经干细胞的冻存１７２丄５神经干细胞的复苏１７２．２神经干细胞的鉴定１８２１．２．１Ｎ的ｔｉｎ免疫英光化学染色８

5、２．２．２神经干细胞的分化鉴定１８２．３神经干细胞的诱导分化１９３領果２０３１２．神经干细胞的分离培养０３丄１原代细胞的培养２０３丄２神经干细胞传代培养２１３２．２神经干细胞及神经干细胞诱导分化的鉴定２３．３神经干细胞的复苏２４４対论２６５３結０参考文献３１综述３５论文发表情况４１致谢４２昆明医科大学硕±研巧生学位论文如大鼠神经干细胞的分离、培养与鉴定中文巧要硕±研巧生：黄涛导师；杨智勇教授昆明医科大学第一附属医院神经外科＇ａｎ一柏金森病（Ｐｒｋｉｎ

6、ｓｏｓｄｉｓｅａｓｅＰＤ）是种与年龄相关的神经系统退行性，疾病。既往研巧认为成年哺乳动物中枢神经系统细胞无再生能力，当成年动物脑或脊髓内的神经细胞因损伤、疾病及自然调ｔ等因素逐渐减少，而不能被其他细胞更新、替代；进而出现神经系统退行性疾病。一神经干细胞（ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓＮＳＣｓ）是种具有多分化潜能细胞，能通，过对称分裂、不对称分裂产生子代神经干细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。假如能够将神经干细胞定向诱导分化，并且通过移植进入机体，可能可一＾＾为治疗＾帕金森病为代表的神经系统退行性疾病提供个新的途径。目的：

7、４ｄＳＤ大鼠－从孕１胚胎（ＳｕｅＤａｗｌｅＳＤ）中，ｐｒａｇｙ，脑分离神经干细胞并且进行培养、诱导分化及鉴定。方法：１１．神经干细胞的分离：取孕４ｄ胚胎ＳＤ大鼠断头处死，置于体积分数为７５％乙醇中浸泡消毒１５ｍｉｎ，无菌条件下取出全脑，置于ＰＢＳ培养皿中，切除小脑、脑３１干、脑膜、血管等，ｍｍ，无菌解剖分离庇胎腹侧中脑组织并且剪成的碎－Ｈａｎｋｓ液漂洗后火焰抛光的吸管吹打块，Ｄ，、２００目筛网过滤制备成单细胞、ＯＯ、Ｘ悬液。离也巧ｒ／ｍｉｎ，离也半径１０ｃｍ）５ｍｉｎ３次，去除上清液，调整细胞５密度至２ｘ１〇个／