sd大鼠scgs的培养与鉴定

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1、SD大鼠SCGs的培养与鉴定刘锦愉陈首韩创业(广丙医科大学第一附属医院530021)【摘要】颈上交感祌经节(SCG)祌经元是研究交感祌经功能很好的材料，体外培养颈上交感神经节神经元非常有利于研究神经细胞的发育和可塑性，目前在哺乳动物交感神经细胞培养中，应用最为广泛的是大鼠SCG交感神经元的培养。木文探讨了SD大鼠SCGs的培养与鉴定的方法，并进行了初步的总结。【关键词】SD大鼠SCGs培养鉴定【中图分类号】R741【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)12-0221-02颈上交感神经节(SCG)神经元是心交感节后神经元，调控呼吸、血压、心率、体温以及立毛

2、活动，是研究交感神经功能很好的材料。它的节前纤维能够释放乙酰胆碱(ACh),可以作用于突触后烟碱型乙酰肭碱受体(nAChR),该通道调控祌经节后纤维，也就是肾上腺素能纤维末端递质儿荼酚胺类物质的释放，进而而调节心血管的功能。因此通过研究全麻药对SCG细胞的nACnR通道电流的直接作用和对SCG祌经无儿茶酚胺类物质分泌活动的影响，对于了解其诱发心血管疾病的机制有重要意义［1］。1材料与方法1.1材料清洁级SD大藏，雌雄均可，Id龄10-20只。1.2方法1.2.1SD大鼠SCGs的分离与培养将SD大鼠冰冻麻醉后，腹面固定，在颂下正中线处切口，暴露出颌下腺，然后用显微手术镊钝性

3、划开肌肉层，把气管暴露出来，找到两侧的颈总动脉，并且以此为标志迅速的颈总动脉鞘。用镊子挑起颈总动脉，可以看到下面有纵向伴行的白色透明的发丝粗细的迷走祌经，上行到颈总动脉分岔处。再挑起颈总动脉分岔处，在下面可以看到一梭形膨大的组织，就是颈上神经节。用显微手术镊夹取其两端，快速分离摘取，放在冰上预冷的D-hanks液中暂吋保存；待两侧都摘取完毕后，小心剥离其表面附着的结缔组织和被膜，用显微剪剪碎后放在浓度为0.1%的胶原酶中37摄氏度消化0.5h,消化完成后用2mlDMEM培养基清洗消化液，重复3次，每次lOmin。然后再放在0.25%的胰蛋白酶中同样温度消化0.5h,最后置于

4、DMEM培养基中清洗三次。并用抛光的不同U径的巴氏吸管吹打，静置后取上清，轻柔吹打之后过2000筛网，80g离心五分钟收集细胞，就获得了分散的SCG细胞［2,3】。将分离得到的细胞转移到直径35mm的培养皿中，在1X70倒置显微镜下（Olympus公司，日本）观察。剩下的细胞分装在35mm的培养皿置于37C、5%C02培养箱或者放置于孵育液中室温下保存2-5h备用。1.2.2形态学观察和测量为提高SCGs的存活率，可在DMEM培养基中加入人重组胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）o胶质细胞源性神经营养因子（glialcellderivedneurotrophicfactor

5、,GDNF）具冇多效能的神经营养作用，能促进大鼠胚胎中脑多巴胺能神经元的存活、再生及形态分化，是最强的促运动神经元存活、生长的营养因子，对感觉神经元也有促进作用，对交感、副交感神经元具有保护作用。1.2.3免疫细胞化学染色将SD大鼠SCG神经元培养24h后，丢掉培养液，用DPBS缓冲液漂洗圆玻片大约2min后置于4摄氏度丙酮室温固定lOmin,DPBS漂洗4次，每次洗5min。然后将人鼠抗神经微丝单克隆抗体（NF200）用抗体稀释液按h200稀释成工作液，50ul/圆玻片，用只加等量抗体稀释液的作为阴性对照，37C湿盒孵育lh后转移到4摄氏度冰箱过夜，翌早用DPBS漂洗3次

6、，每次漂洗5min，然后用FITC标记的抗大鼠IgG的二抗37摄氏度孵育（用DPBS按I:1000稀释）2h,ddH20漂洗8次，每次3min。封片甘汕封片后在荧光显微镜下观察、照相［4］。2讨论体外培养颈上交感神经节神经元非常冇利于研究神经细胞的发育和可塑性,0前在哺乳动物交感神经细胞培养中，应用最为广泛的是大鼠SCG交感神经元的培养。其优点概括起来分为以下几点：SCG的位置固定，取材也比较容易，而II从胚胎到成熟期的大鼠中都可以取材培养。此外从SCG中能够分离得到纯度较高的的交感神经元。交感神经元的适应能力也很强，能够在长吋间内保持神经元的健康和群体的稳定特性。还有比较

7、重要的是培养的交感神经元也能够表达成熟的交感神经元在原位组织时的各种特性。因此可以以颈上交感神经节神经元作为研宄多种病理分子机制以及发病原因的材料。肖哲曼等人以颈上神经节神经元为材料探讨乙醇对培养的颈上神经元电压依赖性Na+通道的影响。SCGs高度表达Navi.7通道，用该神经元为平台可以研宄药物对Nayl.7通道的作用。因为Navl.7通道在疼痛通路中起者非常重要的作用，例如，Navl.7编码的SCNgA基因突变可以引起原发性红斑肢痛症，主要表现是疼痛，红斑，发热，肢体肿胀等［5】。参考文献［1］张成密，王振猛/