SD大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

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1、中国兽医学报2008年12月第28卷第12期ChinJVetSciDec．2008Vo1．28No．121445SD大鼠近端肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定王林，卓丽玲，顾建红，路浩，王富民，刘宗平(扬州大学兽医学院，江苏扬州225009)摘要：采用机械研磨、筛网过滤和酶消化相结合的方法获取肾小管节段进行原代培养，以免疫组织化学法和细胞化学染色法鉴定培养细胞。结果表明，肾小管上皮细胞围绕肾小管节段呈岛屿状向四周逐渐生长并于第4～7天处于对数生长期，培养细胞角蛋白ck18表达阳性，碱性磷酸酶染色阳性，证实培养细胞为近端肾小管上皮细胞，且纯度较高。关键词：肾小管

2、上皮细胞；细胞培养；免疫组织化学；细胞化学染色中图分类号：$865．13；Q813．1文献标识码：A文章编号：1005—4545(2008)12—1445—04PrimarycultureandidentificationofproximalrenaltubularepithelialcellsinSDratWANGLin，ZHUOLi—ling，GUJian—hong，LUHao，WANGFu—min，LIUZong-ping(CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity，Yangzhou，Jiangsu2

3、25009，China)Abstract：Therenaltubularsegmentswerecollectedbymechanicalgrinding，filteringandchemicaldigestivemethodsandtherenaltubularepithelialcellswereprimarilycultured．Immunohistochemicalmethodandcytochemicalstainingwereappliedtoidentifythecelltypes．Theresultsindicatedthatrenaltu

4、bularepithelialcellscouldgrowuptothevicinitygraduallyaroundtheanchoredrenaltubularsegments，displayingthetypicalislandslayout．Theygrewinlogarithmgrowingphasefrom4to7days．Theexpressionofcytokeratin18andalkalinephosphatase(ALP)stai—ningoftheculturedcellswerepositive．Therebytheculture

5、dcellswereprovedtobeproximalrenaltubularepithelialcellsanditspuritywasveryhigh．Keywords：renaltubularepithelialcell；cellculture；immunocytochemistry；cytochemicalstaining*C0r7s户。dgauthor肾脏是机体的主要排泄器官，也是许多毒物和岛素、转铁蛋白、三碘甲状腺氨酸(T。)等。本试验药物(如镉、氟、庆大霉素等)损伤的靶器官。’肾小管的目的是建立操作简便、纯度高的近端肾小管细胞作为原尿吸收的

6、主要场所，是多种毒物损伤的主要培养模型，为深入研究毒物对肾脏损伤的发病机理部位。近端小管是肾小管中最长最粗的一段，原尿及治疗药物筛选提供一个良好实验平台。中几乎全部的葡萄糖、氨基酸和蛋白质，以及大部分水、离子和尿素均在近端小管重吸收；一些毒物或药l材料与方法物的代谢终产物可以通过近端小管上皮细胞直接分1．1试验动物SPF级SD大鼠，雌雄不限，体质泌进入尿液。因此，建立纯化近端肾小管上皮细胞量8O～100g，由扬州大学比较医学中心提供。原代培养模型，对于体外研究化学毒物肾毒性和治1．2仪器与试剂CO：培养箱(Revco)；培养板疗药物的筛选具有重要意义l1]

7、。国外最早从1975(Costar)；倒置相差显微镜(Nikon)；低温高速离心年开始培养肾小管上皮细胞_3]，虽然目前国内外已机(Jouan)。胎牛血清FBS(杭州四季清公司)；细胞有多种分离培养方法[4。]，但过程复杂，某些关键步培养液DMEM／F12(1：1)(Gibco)；胰蛋白酶和骤存在较大差异；同时需加人多种促生长因子，如胰EDTA(Sigma)；抗细胞角质素抗体(cytoteratin18)、链霉亲和素一生物素一过氧化物酶(SABc)即用型试收稿日期：2007—07-23剂盒购自武汉博士德公司；联苯胺(DAB)显色试剂基金项目：江苏省高校“青

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