大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和软骨细胞表型定向分化的实验研究

《大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和软骨细胞表型定向分化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、广西医科大学硕士学位论文大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和软骨细胞表型定向分化的实验研究姓名：丁晓飞申请学位级别：硕士专业：骨外科指导教师：赵劲民;杨志2003.5.1大鼠骨髓间充质干细胞分离、。体外培养和向软骨细胞表型定向分化的实验研究摘要目的：探讨研究分离骨髓间充质干细胞(MSCs)并诱导其向软骨细胞转化的体外培养方法，同时从组织形态学对MSCs生长特征进行观察，为软骨组织工程的种子细胞来源提供实验依据。^／方法：抽取大鼠四肢骨髓，Percoll梯度分离液离心分(离结合贴壁筛选法得到MSCs，在含15％FBS的低糖DMEM培养液中，置于37℃，5％C0

2、2培养箱内培养lO-14d。传代后以15％FBS的高糖DMEM培养液(含地塞米松10～mol／L，VitC50ug／m1)对其进行诱导培养。观测在体外培养条件下MSCs的形态、生长特点和诱导培养后软骨特异性基质的表达情况。结果：1、分离获取了较高纯度的MSCs，保持了细胞的活性。2、MSCs原代培养呈均匀分布的集落样生长，呈长梭形：传代培养中形态特性无明显变化，细胞均质性明显提高。3、各代培养中碱性磷酸酶染色均呈阴性；诱导后的细胞由梭形向多角形、多边形转变，对甲苯胺蓝呈现强的异染性反应，II型胶原免疫组化阳性。／结论：1、采用Percoll梯度分离液离心分离

3、结合贴壁筛选法可获得较高纯度和活性的MSCs，是简便有效、实用可行的方法。2、MSCs在体外培养条件下能大量增殖。通过离体培养，可使体内环境下低丰度的MSCs实现数量扩增。3、MSCs在特定培养液的诱导下能向软骨细胞表型转化，并能分泌软骨特异性基质，可成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源。关键词：间充质干砌i骨旨细胞痞彝。软骨分化尺文体外罗Anexperimentalstudyinisolation，cultureandchondrogenicphenotypedifferentiationofmesenchymalstemcells(MSCs)fromth

4、ebonemarrowofratsinvitro．AbstractObjective：Toexploreamethodofisolation，cultureandchondrocyticphenotypedifferentiationofmesenchymalstemcells(MSCs)fromthebonemarrowofratsinvitroandtoobservethebiologicalcharacteristicsofMSCshistomorphologicallyinordertoofferexperimentalreferenceforthe

5、resourcesofseedingcellsincartilagetissueengineering．Methods：ThebonemarrowwasaspiratedfromthebonesoflimbsoftheratsandwasisolatedbygradientcentrifugationinPercoll．ThemonouclearcellswerecollectedandculturedinDMEM-LGwith15％fatalbovineserum(FBS)．Culturesweremaintainedat37℃inhumidifiedat

6、mospherechambercontaining5％C02for310—14d．ThehigherpurityofMSCswereobtainedbytherepeatedremovalofnonadherentcells．ThepassagecellswereinducedinDMEM-HGwith15％FBS。19。mol／Ldexamethasone，50ug／mlVitC．Thechangesofmorphology，growthandproliferationinvitroandexpressionofspecificchondrogenicma

7、trixafterinducingwereobserved。Results：(1)MSCs，separatedfromthebonemarrowofrats，werecollectedinhigherpuritybygradientcentrifugationinPercoltandstillkeptthecells’activity．(国PrimaryMSCsproliferatedinvisiblesymmetriccolonieswithlong—spindleshape．Themorphologicalcharacteristicsofmarrow-

8、derivedMSCshadnochangeduri