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1、大鼠胃壁细胞的分离及培养—医学论文大鼠胃壁细胞的分离及培养—医学论文作者：陈蕾黄威权孙绪德吕宝真蒲若蕾【关键词】胃壁细胞关键词：胃壁细胞细胞分离细胞培养摘要：目的完成胃壁细胞分离及纯化，建立原代培养胃壁细胞的方法.方法制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育，并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞,Percoll梯度离心富集胃壁细胞，用含100mL・L-l血清的PBS或培养液，时斧贴壁去除成纤维细胞，然后，将壁细胞接种于培养板中，培养液用无血清的1：lHann^sF-12/DMEM培养，内含胰岛素5mg・L-l,氢化可地
2、松4ug・L-l,转铁蛋白5mg&#l25391-1,硒酸钠5ug・L-l,牛血清白蛋白2g&#l25391-1,表皮生长因子25ug・L-1,葡萄糖1.98g&#l25391-1持续培养可达lwk以上.结果获得的壁细胞经fl丫噪橙(acridineorange,A0)鉴定纯度达80%以上，原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长，且生长状态良好.结论此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养，为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础.Keywords:gastricparietalcellcellisolationcellcult
3、ureAbstract:ATMToestablishanewmodelofisolationandprimarycultureinvitroforfurtherstudy.METHODSThestomachsofratswererevertedtoformsacswiththemucosafacingoutwardandserosafacinginward・PronaseEsolutionwasinjectedintothesac1umina.Thestomachswereincubat-edin950mL・L-l02and50mL・L-lC
4、02at37°Cfor60min,thenstirredatroomtemperatureandthedispersedcel1swerecollectedtobeloadedonadensitygradient(40%~60%percell)centrifugation.Forremovaloffibroblasts,thecel1sweresuspendedinPSScontaininglOOmL・LTfetalbovineserumFBSandpreattachedinflaskscoatedwithrattailglueat37°Cfor30mi
5、n.Therichparietalcellsweremaintainedini：lHam"sF-12/DMEMcontainedinsu1in5mg・L-1,hy-drocortaison4ug・L-1,tranferrin5mg・LT,sodiumselen-ite5ug・L-l,BSA2g・L-l,epidermalgrowthfactor(EGF)25ug・LT,D-glucose1.98g・L-1・Theywerecul-turedcontinuouslyinserum-fr
6、eemediaandsurvivedforoveroneweek・RESULTSIdentifiedbyacridineorange(AO),thepurityofisolatedandculturedratgastricparietalcellswasover80%andtheygrewverywe11・CONCLUSIONOurmethodsandconditionaresuitablefortheisolationandprimarycultureofratgastricparietalcells.o引言胃粘膜的壁细胞属于高度特异分化的终末细胞，主要功能是分泌
7、胃酸和内因子，其分离和培养均较困难，到目前为止，大鼠胃壁细胞的分离和培养方法在国内均未见报道，我们在对大鼠胃粘膜壁细胞分离和原代培养的工作中获得了一些经验和体会.1材料和方法1.1材料选龄的雄性健康SD大鼠4〜5只，均来自笫四军医大学实验动物中心•链霉蛋白酶购自Merck公司，Ham'sF-12/DMEM,表皮生长因子、转铁蛋白购自Gibco公司，硒酸钠、胰岛素、氢化可地松均来自Sigma公司，Pecoll购自Pharmacia公司，二硫苏糖(dithiothreitol,DTT)购自原平皓生物技术公司,牛血清口蛋、EDTA购自华美公司•胎牛血清、HEPES购自
