丹参提取液对hmgb1胞外释放的抑制作用

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1、丹参提取液对HMGB1胞外释放的抑制作用：王婷婷徐明，陈国千王春新倪芳颖帅朝霞【摘要】　　目的：研究丹参对内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活后巨噬细胞高迁移率族蛋白B1（highmobilitygroupbox1,HMGB1）释放和内毒素血症小鼠血清HMGB1水平的影响。方法：使用不同浓度的丹参提取液处理100ng/mlLPS激活的培养巨噬细胞株RAGB1水平和细胞HMGB1mRNA表达的变化，并通过腹腔内注射LPS建立的内毒素血症小鼠模型，观察丹参提取液对内毒素血症小鼠血清HMGB1水平和存活率的影响

2、。细胞培养上清液和血清HMGB1含量采用酶联免疫分析方法检测，细胞HMGB1mRNA表达采用RTPCR方法检测。结果：丹参提取液明显抑制LPS激活后的巨噬细胞HMGB1释放和HMGB1mRNA表达，降低内毒素血症小鼠血清HMGB1水平并提高存活率。结论：丹参有抑制巨噬细胞HMGB1释放和保护内毒素血症小鼠的作用。【关键词】丹参；高迁移率族蛋白B1；巨噬细胞；内毒素血症　　［Abstract］Objective:TostudytheeffectsofSalviamiltiorrhizaonthereleaseofhighmobili

3、tygroupbox1(HMGB1)fromendotoxinstimulatedmacrophagesandserumHMGB1levelofendotoxemiamice.Methods：HMGB1concentrationintheculturemediumandexpressionofHMGB1mRNAelinkedimmunosorbentassayandRTPCR,respectively,after100ng/mllipopolysaccharide(LPS)stimulatedmacrophagelikeR

4、AGB1levelandsurvivalrateofendotoxemiamiceiltiorrhizaextractmarkedlysuppressedthereleaseofHMGB1andexpressionofHMGB1mRNAinLPSstimulatedmacrophages,anddecreasedserumHMGB1levelofendotoxemiamiceiltiorrhizasuppressedextracellularreleaseofHMGB1inendotoxinstimulatedmacrophag

5、es,andconferredprotectionagainstendotoxinlethality.　　［Keyiltiorrhiza;highmobilitygroupbox1;macrophages;endotoxemia　　胞外高迁移率族蛋白B1（highmobilitygroupbox1,HMGB1）为近年发现的一种晚期炎症介质，在脓毒症、关节炎、肺炎、急性胰腺炎等疾病的发病机制中起着十分重要的作用［1-4］。鉴于HMGB1在诸多炎症性疾病病理中的重要性，HMGB1靶向治疗研究已引起广泛重视［3,4］。丹参(Salviam

6、iltiorrhiza)为唇形科鼠尾草属植物的干燥根及根茎，具有活血通经、凉血消肿、祛痈肿丹毒之功效［5,6］。我们在筛选中药抗HMGB1成分研究中发现丹参提取液具有明显抑制巨噬细胞HMGB1释放和保护内毒素血症小鼠的作用，现报告如下。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　BALB/c小鼠（6～8周，雄性，20～25g）由江苏省血吸虫病防治研究所提供；丹参购自甘肃天水药材供应站(经无锡市人民医院许英华主任药师鉴定)；巨噬细胞株RAMLV一步法RTPCR试剂盒为上海捷瑞公司产品。　　1.2方法　　1.2.1丹参提取液的制备　　丹参

7、经纯水漂洗后，水煎2次，合并2次水煎液，0.2μm过滤器过滤并调整浓度至1g/ml(按生药计算)。　　1.2.2HMGB1浓度测定　　采用酶联免疫分析（ELISA）方法。小鼠HMGB1ELISA试剂盒为武汉中美科技有限公司产品，按产品使用说明书进行。　　1.2.3HMGB1mRNA表达检测　　应用mRNA提取试剂盒，在细胞培养皿中直接裂解细胞mRNA。HMGB1引物（扩增片段为680bp）：5′ATGGGCAAAGGAGATCCTA3′（上游），5′ATTCATCATCATCATCTTCT3′（下游）。以三磷酸甘油醛脱氢酶（

8、GADPH）作为内参对照，引物（扩增片段为309bp）：5′TCCCTCAAGATTGTCAGCAA3′（上游），5′AGATCCACAACGGATACATT3′（下游）。HMGB1mRNA表达水平以HMGB1与GADPH基因