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时间:2018-05-01
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1、丹参提取液对HMGB1胞外释放的抑制作用:王婷婷徐明,陈国千王春新倪芳颖帅朝霞【摘要】 目的:研究丹参对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活后巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)释放和内毒素血症小鼠血清HMGB1水平的影响。方法:使用不同浓度的丹参提取液处理100ng/mlLPS激活的培养巨噬细胞株RAGB1水平和细胞HMGB1mRNA表达的变化,并通过腹腔内注射LPS建立的内毒素血症小鼠模型,观察丹参提取液对内毒素血症小鼠血清HMGB1水平和存活率的影响
2、。细胞培养上清液和血清HMGB1含量采用酶联免疫分析方法检测,细胞HMGB1mRNA表达采用RTPCR方法检测。结果:丹参提取液明显抑制LPS激活后的巨噬细胞HMGB1释放和HMGB1mRNA表达,降低内毒素血症小鼠血清HMGB1水平并提高存活率。结论:丹参有抑制巨噬细胞HMGB1释放和保护内毒素血症小鼠的作用。【关键词】丹参;高迁移率族蛋白B1;巨噬细胞;内毒素血症 [Abstract]Objective:TostudytheeffectsofSalviamiltiorrhizaonthereleaseofhighmobili
3、tygroupbox1(HMGB1)fromendotoxinstimulatedmacrophagesandserumHMGB1levelofendotoxemiamice.Methods:HMGB1concentrationintheculturemediumandexpressionofHMGB1mRNAelinkedimmunosorbentassayandRTPCR,respectively,after100ng/mllipopolysaccharide(LPS)stimulatedmacrophagelikeR
4、AGB1levelandsurvivalrateofendotoxemiamiceiltiorrhizaextractmarkedlysuppressedthereleaseofHMGB1andexpressionofHMGB1mRNAinLPSstimulatedmacrophages,anddecreasedserumHMGB1levelofendotoxemiamiceiltiorrhizasuppressedextracellularreleaseofHMGB1inendotoxinstimulatedmacrophag
5、es,andconferredprotectionagainstendotoxinlethality. [Keyiltiorrhiza;highmobilitygroupbox1;macrophages;endotoxemia 胞外高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)为近年发现的一种晚期炎症介质,在脓毒症、关节炎、肺炎、急性胰腺炎等疾病的发病机制中起着十分重要的作用[1-4]。鉴于HMGB1在诸多炎症性疾病病理中的重要性,HMGB1靶向治疗研究已引起广泛重视[3,4]。丹参(Salviam
6、iltiorrhiza)为唇形科鼠尾草属植物的干燥根及根茎,具有活血通经、凉血消肿、祛痈肿丹毒之功效[5,6]。我们在筛选中药抗HMGB1成分研究中发现丹参提取液具有明显抑制巨噬细胞HMGB1释放和保护内毒素血症小鼠的作用,现报告如下。 1材料与方法 1.1实验材料 BALB/c小鼠(6~8周,雄性,20~25g)由江苏省血吸虫病防治研究所提供;丹参购自甘肃天水药材供应站(经无锡市人民医院许英华主任药师鉴定);巨噬细胞株RAMLV一步法RTPCR试剂盒为上海捷瑞公司产品。 1.2方法 1.2.1丹参提取液的制备 丹参
7、经纯水漂洗后,水煎2次,合并2次水煎液,0.2μm过滤器过滤并调整浓度至1g/ml(按生药计算)。 1.2.2HMGB1浓度测定 采用酶联免疫分析(ELISA)方法。小鼠HMGB1ELISA试剂盒为武汉中美科技有限公司产品,按产品使用说明书进行。 1.2.3HMGB1mRNA表达检测 应用mRNA提取试剂盒,在细胞培养皿中直接裂解细胞mRNA。HMGB1引物(扩增片段为680bp):5′ATGGGCAAAGGAGATCCTA3′(上游),5′ATTCATCATCATCATCTTCT3′(下游)。以三磷酸甘油醛脱氢酶(
8、GADPH)作为内参对照,引物(扩增片段为309bp):5′TCCCTCAAGATTGTCAGCAA3′(上游),5′AGATCCACAACGGATACATT3′(下游)。HMGB1mRNA表达水平以HMGB1与GADPH基因
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