rhgcsf促进不同性别大鼠缺血后肢血管新生的作用

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1、rhGCSF促进不同性别大鼠缺血后肢血管新生的作用：刘兵王豪夫刘冰赵宗刚王曰伟【摘要】目的观察重组人粒细胞集落刺激因子（rhGCSF）促进不同性别成年大鼠缺血后肢血管新生作用。方法健康成年雄性和雌性ethodsHealthyadultmaleandfemaleicmodeloralarteriesandtheirbranches.Theratsizedtotentalgroup.SubcutaneousinjectionofrhGCSFental,andequalvolumeNStothecontrol.;theVEGFo

2、ftheadductorbyimmunohistochemistry.ResultsTheentalthanthatinthecontrol,thedifferencesbetsofthegender(P>0.05).ConclusionSubcutaneousinjectionofrhGCSFcanfacilitateangiogenesisofischemiclimb,improveischemicstatusofthelimb,theeffectsdonotshoulatingfactor,rebinant;Ang

3、iogenesisregulator;Ischemia;Rats下肢动脉硬化闭塞症是外周动脉阻塞性疾病中最常见的疾病，易受累的部位包括小腿胫腓动脉、腘动脉、股动脉及主髂动脉，其中股、腘动脉发病率最高。临床表现以间歇性跛行、静息痛、难治性溃疡等下肢缺血、坏死症状为特点。该病的治疗可分为手术治疗和非手术治疗，虽然方法较多,但都有不足之处。近年来，由于在末梢血中发现了血管内皮祖细胞(EPC)，对血管新生的概念有了新的认识,EPC和骨髓细胞移植用于血管新生疗法的研究已经成为人们关注的焦点。应用骨髓干细胞动员剂将骨髓干细胞“驱赶”到外周血

4、，增加外周血EPC的数量，可达到自体干细胞移植治疗缺血性疾病的目的。已有研究证实，重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)作为一种常用的骨髓动员剂，可以显著刺激骨髓造血，提高外周血干细胞数量。但对于实验个体的性别、年龄、体质量等因素是否能影响骨髓造血及缺血肢体血管新生还没有深入的研究。本实验拟通过制作动物肢体缺血模型，应用rhGCSF刺激骨髓造血，增加大鼠外周血干细胞的数量，观察rhGCSF是否可促进缺血肢体新生血管的生成，以及其作用是否存在性别差异。1材料和方法1.1实验动物及制剂实验选用3～4月龄雄性agingSyst

5、em(V1.6)图像分析系统由青岛市市立医院病理科提供。1.2大鼠下肢缺血模型的制备大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后，常规备皮、消毒、铺巾。经左侧腹股沟韧带中点作一长约1.0～1.5cm纵形皮肤切口，游离股动脉，在股动脉起始处,用1号丝线结扎并切断股动脉的分支，制成大鼠后肢缺血模型。成模后雄性大鼠和雌性大鼠各随机分为对照组和实验组，每组10只。1.3给药及一般情况观察大鼠后肢缺血模型制备成功3h后，各组按以下步骤给药：实验组给予10μg/kg的rhGCSF皮下注射，连续5d。对照组按实验组的给药方法给予等量生理盐水。实验开始后，每天

6、观察各组大鼠的一般状况，如生命体征、饮食、切口愈合情况、毛发有无脱落及运动情况等。实验组和对照组在术前和术后第5天各测血常规1次。1.4组织切片和微血管密度测量术后4周处死大鼠，取左后肢内收肌中段肌肉组织1.0cm×0.5cm×0.3cm大小,用甲醛固定，石蜡包埋，行肌肉横断面切片，片厚5μm，连切10张。取第2张和第10张行苏木精伊红染色，使用图像分析系统在400倍视野下对切片进行血管密度计数。1.5VEGF阳性表达血管数检测取石蜡包埋的内收肌标本，行肌肉横断面切片，片厚5μm。按Elivision二步法脱蜡，磷酸盐缓冲液冲

7、洗后滴加一抗，25℃孵育1h。再滴加二抗，孵育50min。DAB显色，苏木精复染，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。在400倍视野下，观察血管内皮细胞胞浆染色呈棕黄色者为阳性细胞，该毛细血管即为VEGF阳性表达的血管。每一标本随机选取5个视野，用图像分析系统计数VEGF阳性表达的血管数，取其平均值。1.6统计分析采用SPSS11.5软件进行统计分析。数据以±s表示，组内实验前后比较应用配对t检验，雄性实验组和雄性对照组、雌性实验组和雌性对照组、雄性实验组和雌性实验组之间比较应用两独立样本的t检验。2结果2.1大体观察雄性实验组大鼠因麻

8、醉意外死亡1只，余者均存活。在观察期间各组大鼠均未见左后肢缺血坏死。术后3d，雄性对照组有1只大鼠手术切口出现0.5cm×0.5cm大小溃烂。雌性对照组大鼠出现跛行2只，其余大鼠均未出现跛行或溃疡。对照组大鼠左后肢毛发脱落多于实验组大鼠。2.2血常规情况实验组大