rhg-csf对大鼠急性缺血再灌注脑损伤后survivin、egr-1表达及血管再生的影响

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1、郑州大学硕士学位论文rhG--CSF对大鼠急性缺血再灌注脑损伤后Survivin、Egr--1表达及血管再生的影响姓名：程鹤云申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：滕军放201204摘要rhG．CSF对大鼠急性缺血再灌注脑损伤后Survivin、Egr-1表达及血管再生的影响中国已于1999年进入老龄化社会，老年人口的增长，致使一系列老年病如缺血性脑血管意外逐年增多。此类疾病发病率、致残率、死亡率和复发率均很高，成为严重危害着人类生命健康的三大主要疾病之一，给家庭、社会带来沉重的负累。脑微血管在维持神经元的稳定方面起重要作用：脑缺血性损伤时，随缺血时

2、间的延长，微血管的数量逐渐增加。研究表明缺血半暗带血管微密度增加的患者存活率高，故缺血后血管再生的情况与脑血管病的进展转归关系密切，故研究急性脑损伤后血管再生也成为重点所在。粒细胞集落刺激因子(OranulocyteColonyStimulatingFactor，G．CSF)是由Metcalf等科学家于1980年第一次发现的一种存在于人体内的多肽链的细胞生长因子，具有特异性调节粒细胞的增殖与分化，增强粒细胞功能及对机体防御应激功能。G．CSF．R存在于神经元和胶质细胞，这提示G．CSF在在神经系统的损伤修复方面起着一定的保护机制作用，故其在神经修复与再生

3、，神经系统受损保护领域受到越来越广泛的关注，其作用于神经系统的主要机制有抗神经元细胞凋亡、促进内源性骨髓干细胞迁徙至受损部位，与特定的内因子共同作用下进行增殖，分化为新生的神经元细胞、拮抗炎症反应、阻断兴奋性氨基酸毒性以及促进血管生成等。血管新生是以出芽方式在原有血管基础上形成新的毛细血管的过程，其核心是血管内皮细胞的分裂增殖。Survivin可调控Caspase．3等凋亡因子的表达，是重要的抗凋亡因子，近来血管平滑肌上，体外立体管腔内皮细胞和体内新生毛细血管上均发现Survivin强烈表达，抑制Survivin的表达可抑制血管生成，强制表达则促血管内皮

4、发生，提示其在新生血管形成的过程中发挥着重要的作用。Egr-1的功能主要表现在参与细胞内信号转导及调控多种基因的表达，包括生长因子基因、信号传导基因、转录因子基因和癌基因等，对细胞生长、发育、分化和损伤修复起重要作用，也可调控促血管形成因子，促进血管生成。Survivin发挥促进这些因子的表达及分泌的功能时，需要转录因子Egr-1的参与，同时survivn又可在一定范围影响Egr-1的表达和作用。本实验通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤MCAO模型，观察大鼠脑缺血再灌摘要注后额叶、颞叶缺血半暗带Egr．1、Survivin和微血管生成的变化，分析Egr．1与S

5、urvivin、之间可能存在的相关关系；以及重组人粒细胞集落刺激因子(recombinanthumanGranulocyteColonyStimulatingFactor，G．CSF)对前述二者的影响，探讨重组人粒细胞集落刺激因子在神经保护方而的可能机制，以期为rhG．CSF临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。实验动物分组和给药方法2．3月龄，质量280．3209封闭群健康雄性清洁级Sprague．Dawley(SD)大鼠72只，由河南省实验动物中心提供。将参与实验SD大鼠参照统计学方法随机选入假手术组(A)，缺血再灌注损伤+生理盐水对照组(模型组)(B

6、)与缺血再灌注损伤+G．CSF给药组(治疗组)(C)(n=24)，各组根据处死时间不等又分为7d组，14d组和21d组，每亚组入选8只。入选治疗组大鼠自2h后白腹部皮下注射G．CSFSOpg／(kg·d)，单次注射量7．5ml，连续用药。MCAO模型制备、标本检测采用改良的Longa线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，在处理后的不同时间点处死大鼠，取脑组织常规固定、脱水、石蜡包埋、制成切片。采用SP法进行免疫组化染色，观察各组Survivin、Egr-1与CD31指示的缺血半暗带微血管表达的变化。应用图像分析系统测量阳性区积分光密度值。统计学方法采

7、用SPSS17．0进行统计分析，组间阳性细胞数的比较用单因素方差分析及LSD—t检验，不同时间点间阳性细胞数的比较采用成组设计资料的t检验，检验水准Q--=0．05，双指标相关性采用pearson相关系数进行检验。结果Surviving表达．局灶性缺血再灌注后Survivin阳性细胞于假手术组数量稀少，排列稀疏，染色浅淡，模型组及治疗组表达阳性细胞明显增多，主要表达在神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞的胞浆，有少数胞核也有表达，特别是血管增生活跃部分阳性细胞明显增加，模型组各时间点Survivin均较假手术组明显增加，差异有统计学意义(p<0．05)，治

8、疗组再灌注14d时达高峰，7d，14天时间点Survivin表达均较模型组明显增