抑制sonic hedgehog信号通路对急性脑梗死大鼠血管再生的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityForthedegreeofMasterInfluencesofInhibitingSonicHedgehogSignalingPathwayonVascularRegenerationinRatswithAcuteCerebralIschemiaByPeilinZhangSupervisor：ProfJiyuLouDepartmentofNeurologyTheSecondClinicalCollegeofZhengzhouUn

2、iversityApril，2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：獬主木来日期：>DI≥年么月舌日。学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门

3、或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：乡长兰书琳日期：≥。f>年f月<日摘要抑$1JSonicHedgehog信号通路对急性脑梗死大鼠血管再生的影响研究生张沛琳导师娄季宇郑州大学第二临床学院神经内科河南郑州450014背景

4、和目的目前，随着社会节奏的变快，饮食结构的改变及缺乏运动量等因素，脑血管病的发病率逐年上升，并趋于年轻化，其中缺血性脑血管病(ischemiacerebrovasculardisease，ICVD)所占比例明显增加，成为最为常见的致死、致残疾病之一，研究发现ICVD患者中血管密度高者的预后明显好于血管密度较低者，也有研究证实，脑梗死区血管再生程度与SonicHedgehog(Shh)信号转导通路有关。Shh信号转导通路主要由信号肽(Shh、Ihh、Dhh)、细胞膜表面的跨膜受体(Ptch，Smo)及下游

5、转录因子(Gli蛋白家族)组成，Shh通路激活后主要通过Glil蛋白家族发挥作用。近年来研究发现脑梗死后，缺血脑组织中有Shh信号通路的激活，外源性Shh促进脑梗死后血管的再生与重建，增加缺血组织中血流灌注，促进神经功能的修复，但其机制尚不明了。基于此，本实验用线栓法制作大鼠局灶性永久性脑缺血模型，使用Shh信号转导通路特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)观察不同时间点大鼠缺血皮质区Shh信号通路下游分子Glil、血管再生相关因子VEGF、bFGF及新生血管标记物CDl05的表达，探讨Shh信号

6、转导通路对大鼠缺血侧大脑缺血皮质区血管再生的影响及机制。材料与方法线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞(PermanentMiddleCerebral摘要AreteryOcclusion，PMCAO)模型。健康雄性SD大鼠162只(体重280～3309)随机分为假手术组、脑梗死模型组和环杷明处理组，每组54只大鼠，每组按照缺血时间(脑缺血6h、24h、48h)分为三个亚组，每个亚组18只大鼠。环杷明处理组在大鼠缺血即刻以0．18mg／kg的剂量经腹腔注射环杷明，假手术组和脑梗死模型组在相同时间以相同剂量和

7、方式给予溶剂。其中每个亚组分别在大鼠永久性缺血6h、24h、48h后取8只动物处死取缺血大脑皮质区脑组织，液氮保存后检测GlilmRNA含量，另取10只心脏灌注，甲醛固定后，取缺血大脑皮质区做石蜡切片。采用RT-PCR技术检测缺血侧大脑皮质区GlilmRNA的表达情况；采用免疫组化法检测缺血侧大脑缺血皮质区VEGF、bFGF及CDl05的表达情况。结果(1)缺血侧皮质区域GlilmRNA的检测结果脑缺血6h后，Glil的表达开始升高，并与24h达到高峰，48h开始降低。与假手术组比较，模型组大鼠在脑缺血

8、后6h、24h、48hGlil的表达增高，差异有统计学意义(火0．05)。环杷明组在脑缺血6h后也出现Glil的表达增高，24h达高峰，48小时开始下降，但其表达量与模型组相比明显低与模型组，两组间差异有统计学意义(氏O．05)。(2)缺血侧皮质区VEGF的检测结果免疫组化结果可见，棕黄色的颗粒沉积在胞质中，此即为VEGF阳性表达，VEGF表达在神经细胞、内皮细胞及胶质细胞，假手术组可观察到微量的VEGF表达。与假手术组比较，模型组VEGF