白花丹参对大鼠脑缺血再灌注后神经再生的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5—x‘—jL^刖『舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。13讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。18

2、结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～26参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一30致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。41攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40原创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42白花丹参对大鼠脑缺血再灌注后神经再生的影响研究生：李大伟专业：内科学导师：陈传民

3、教授中文摘要目的观察白花丹参干预对大鼠脑缺血损伤侧新生细胞增殖的影响，探讨脑缺血损伤及白花丹参干预对神经再生的影响及其可能机制，从而为白花丹参治疗缺血性脑血管病提供实验依据，为白花丹参的开发利用提供理论基础。方法1．局灶性脑缺血模型的建立：本实验采用经典的线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)。所用实验动物为雄性成年sD(Sprague—Dawley)大鼠，实验麻醉剂选择10％的水合氯醛腹腔麻醉，麻醉后将特制的线栓经颈总动脉(commoncarotidartery,CCA)插入，沿颈

4、内动脉(intemalcarotidartery，ICA)走行至至大脑中动脉起始部位及大脑前动脉近心端，从而阻断大脑中动脉的血流，使其所供应的脑区出现缺血，进线深度以CCA分叉开始计算大约为18．o士0．5mm。随着缺血时间的延长，其血流灌注部位的功能即出现障碍，如大鼠会出现偏瘫和偏身感觉障碍。手术完成后于脑缺血1h缓慢拔出栓线，同时结扎ECA残端以防止出血，实验大鼠于缺血再灌注后的不同时间点分别处死取脑。2．BrdU掺入方法：BrdU于动物处死取材前三天进行腹腔注射，注射剂量为100mg／kg，每天3次，最后一次注射2h后取材。3．白花丹参制剂制

5、备：白花丹参根洗净凉干，用蒸馏水浸泡2h，煮沸30min，过滤，药渣加3～5倍量水，继续煎煮，煮沸20rain后进行过滤，过滤后将滤液合并混合，滤渣加入适量乙醇混合后过夜沉淀并提取上清液，此过程需重复操作3遍，最后将所有滤液收集混合，混合后放于40。C真空中进行蒸发浓缩，浓缩后加入蒸馏水定容，放于4。C保存备用。4．免疫组织化学方法检测脑内BrdU阳性细胞雄性SD大鼠，随机分为三组：①假手术组；②单纯脑缺血再灌注组：③脑缺血再灌注+白花丹参治疗组。脑缺血1h再灌注14d后取材，制各冰冻切片，采用免疫组织化学标记方法检测BrdU阳性细胞。5．水迷宫实

6、验：雄性SD大鼠，随机分为三组：①假手术组；②单纯脑缺血再灌注组；③脑缺血再灌注+白花丹参治疗组。对大鼠水迷宫的训练于术前5d即开始进行，所有实验大鼠于术前、脑缺血1h再灌注14d分别记录大鼠的逃避潜伏期(escapelatency,EL)。结果1．BrdU阳性细胞表达(1)脑缺血损伤侧纹状体区新生细胞表达：与假手术对照组比较，单纯脑缺血再灌注组新生细胞明显增多(P<0．01)，脑缺血再灌注+白花丹参治疗组新生细胞较单纯脑缺血再灌注组新生细胞明显增多(尸<0．01)；(2)脑缺血损伤侧侧脑室区新生细胞表达：与假手术对照组比较，单纯脑缺血再灌注组新生

7、细胞明显增多(尸<0．01)，脑缺血再灌注+白花丹参治疗组新生细胞较单纯脑缺血再灌注组新生细胞明显增多(P<0．01)；(3)脑缺血损伤侧海马区新生细胞表达：与假手术对照组比较，单纯脑缺血再灌注组新生细胞明显增多(P<0．01)，脑缺血再灌注+白花丹参治疗组新生细胞较单纯脑缺血再灌注组新生细胞明显增多(P

8、花丹参干预可诱导脑内新生细胞增殖，新生增殖细胞在损伤侧大脑皮层、纹状体及海马表达较多。3．白花丹参干预后可使大鼠学习记忆能