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1、丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织及血清中N【摘要】目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织及血清中一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤保护作用的可能机制。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、TanⅡA低、高剂量组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。TanⅡA高、低剂量组于术前连续灌胃给予高、低剂量TanⅡA3d,每日1次。各组于脑缺血90min再灌注24h后进行HE染色,观察病理形态学变化,检测脑组织和血清中NO含量和NOS、iNOS活性的变化。结果TanⅡ
2、A高、低剂量组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,TanⅡA高剂量组缺血改变亦轻于低剂量组。与假手术组比较,缺血再灌注组脑组织和血清中NO含量和NOS、iNOS活性明显升高；与缺血再灌注组比较,TanⅡA高、低剂量组脑组织和血清中NO含量和NOS、iNOS活性均明显降低,高、低剂量组之间差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论TanⅡA可减轻神经元损伤程度,对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与降低NOS、iNOS活性,减少NO含量有关。【关键词】缺血再灌注损伤；一氧化氮；一氧化氮合酶；诱导型一氧化氮合酶；丹参酮ⅡA；大鼠Abstract：Obje
3、ctiveTostudyeffectofTanshinoneⅡA(TanⅡA)onthecontentofNOandtheactivitiesofNOSandiNOSincerebralischemiareperfusion(I/R)injuryrats,andexploreitsprotectivemechanism.MethodsRatslydividedinto4groups,operatedgroup,I/Rgroup,loiddlecerebralarterymocclusion(MCAO)modeladebysuture-occludedmethod.
4、RatsinMCAOfolloorphologicchangesined.ResultThechangeofischemicimpairmentinlooperatedgroup,thecontentofNOandtheactivitiesofNOSandiNOSincreasedat24hofreperfusionintheischemicterritory(P＜0.05).parediareperfusioninjury；NO；NOS；iNOS；TanshinoneⅡA；rat一氧化氮(NO)是机体内重要的信使分子和效应分子,为神经传递、血管舒张、调节神经功能
5、的内源性介质,与神经系统的生理和病理过程关系密切[1],而一氧化氮合酶(NOS)是NO生物合成的限速酶。丹参为唇形科鼠尾草属植物,具有活血化瘀、宁心安神等功效,目前在缺血性脑血管病的治疗中广为应用。有研究发现,丹参能下调缺血所致的NOS表达,使NO合成减少,减轻缺血性脑损伤[2]。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织和血清中NO含量和NOS、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性变化的影响,探讨其保护作用的可能分子生物学机制。 1材料与方法 1.1动物健康g/kg)和高剂量组(30
6、mg/kg)均于术前连续灌胃给药3d,每日1次,假手术组和缺血再灌注组给予等量的生理盐水灌胃。第3日给药后1h建立局灶性脑缺血90min再灌注24h动物模型。 1.3造模参照文献[3]方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。采用颈外动脉插入线栓法,各组均进行左侧大脑中动脉栓塞。采用石蜡线栓,直径约0.27mm,插入深度约18mm,此时线栓头位于大脑中动脉起始部。缺血90min时,抽提线栓实现再灌注。神经功能缺陷评分按照Longa等[3]评分标准,分数在1～3分为模型成功。 1.4HE染色病理形态学观察再灌注24h,各组随机取5只大鼠,用生理盐水和多聚甲醛进行心脏灌
7、流固定,断头取脑。在左侧大脑半球距离嗅球尖端7～11mm之间冠状切取约5mm厚脑组织块,固定、脱水、包埋成腊块,连续切片,厚5μm。连取5张作HE染色,观察病理形态学改变。 1.5指标检测再灌注24h,大鼠均内眦取血,置于干燥试管中,离心,然后将上清液置于干净EP管中,低温保存,用于测定NO、NOS和iNOS。取血完毕后立即将各组大鼠断头取脑,冰盘上快速取一侧大脑皮层,用冰冷生理盐水冲洗掉血液,滤纸吸干水分,于低温环境下称重,置于含有冰冷生理盐水的玻璃匀浆器中(匀浆器放入冰浴中)制成质量分数为10%的脑组织匀浆,然后放置于低温离心机中,4℃离心,取上清液,低温冰
8、箱中保存,
