cd59位点短肽封条对hela细胞凋亡相关基因caspase3和survivin作用

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1、CD59位点短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因caspase3和survivin作用：李先平高美华石学香张蓓程颖【摘要】　　目的检测CD59位点短肽封条对HeLa细胞凋亡相关基因caspase3、survivin表达水平的影响，探讨CD59位点短肽封条促肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法将CD59位点短肽封条作用于HeLa细胞，利用免疫组织化学方法检测短肽封条作用12h和24h后HeLa细胞caspase3、survivin的表达水平。结果caspase3表达随短肽封条剂量和作用时间的增加而增加；survivin表达随短肽封条的剂量和作用时间的增

2、加而减少。结论CD59位点短肽封条能下调survivin的表达并活化caspase3，从而可能导致HeLa细胞的凋亡。【关键词】抗原CD59短肽封条survivincaspase3免疫组织化学　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheeffectofpeptidesealsonCD59toHeLacells,detectexpressionofapoptosisrelatedgenesurvivin,caspase3inHeLacellandinvestigatethemechanismofpeptidesealstoCD

3、59ininducingapoptosisofHeLacells.MethodsThepeptidesealstoCD59munohistochemistryafterinteractione.ConclusionThepeptidesealtoCD59candomunohistochemistry　　CD59是一种以糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚着于细胞膜表面的具有抑制补体效应功能的糖蛋白。它可以通过与C8或C9的竞争性结合而抑制攻膜复合体MAC在细胞膜的形成，是宿主细胞免受活化的补体攻击的最重要的补体调节蛋白。全球医学界始终致力于寻找特异性作用于肿

4、瘤组织或细胞的抗瘤药物。以单克隆抗体为主要载体的“生物导弹”以其特异性高、毒性小等优点，曾被寄予很大的希望。但是由于肿瘤免疫逃逸的问题，使得单克隆抗体的临床应用受到很大限制。研究发现，CD59与肿瘤的生长失控及转移密切相关[1]。由于在很多实体瘤细胞膜表面存在或者高表达CD59等一系列的膜补体调节蛋白,使得肿瘤细胞逃脱了自身的免疫监视以及靶向单克隆抗体治疗中由补体介导的溶细胞作用[2,3],免疫逃逸是导致众多肿瘤治疗方案失败的重要原因。目前，在实体肿瘤的免疫治疗中，一个更加有效的策略是使肿瘤细胞膜上的补体调节蛋白失活或不表达。国内外学者研究证实，C

5、D59分子中N37～H44位氨基酸与人类糖尿病血管增殖症的发生密切相关[4,5]，但与肿瘤细胞逃逸信号密切相关CD59活性位点的研究国内外鲜有报道。本课题组利用噬菌体肽库筛选技术体外合成了可阻断与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽封条[6]。本研究采用该短肽封条作用于HeLa细胞，观察其对HeLa细胞的封闭作用，并探讨其诱导HeLa细胞凋亡的可能机制。现将结果报告如下。　　1材料和方法　　1.1材料　　1000mg/L的CD59位点的短肽封条由本课题组设计，送北京中科亚光生物科技有限公司合成；HeLa细胞由本实验室保存；caspase3、sur

6、vivin免疫组化试剂购于武汉博士德公司。　　1.2方法　　1.2.1CD59位点的短肽封条的设计与合成本课题组利用噬菌体显示技术和生物信息技术从噬菌体随机12肽库中对转染人CD59的CHO细胞和转染突变人CD59的HeLa细胞进行全细胞筛选,经过5轮亲和富集筛选后，得到3条高度同源的多肽序列：HSACDLLMHPMC，HSACDLPMHPMC，HSACDLPKAPed:339HGAAENSLSPSS）都含有H×A××××××P××一级结构。而且，HGAAENSLSPSS含有10个疏水性氨基酸，与获得的含有9个疏水性氨基酸的3种序列比较接近。测序后

7、的碱基序列转换为氨基酸序列，并将一致性的短肽序列提交PIR国际蛋白质数据库进行查询比对，进行同源性分析，未发现有同源性一致的序列。将同源性高的序列送北京中科亚光生物科技有限公司进行短肽合成。　　1.2.2细胞培养在含有体积分数0.008胎牛血清、100mg/L青霉素及链霉素的RPMI1640培养液中，于37℃体积分数0.05CO2培养箱中培养细胞,每48h换液传代1次,取生长良好的细胞进行实验。　　1.2.3caspase3、survivin免疫组织化学染色采用培养的对数生长期的细胞，以每孔105个细胞接种于24孔培养板（每孔铺有一小块盖玻片）,

8、每孔加1mL的RPMI1640完全培养液。实验设立HeLa细胞对照组（Ⅰ组）；HeLa细胞+10mg/LCD59位点的短肽