cd59特异位点短肽封条对t细胞封闭作用论文

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1、CD59特异位点短肽封条对T细胞封闭作用论文【摘要】目的探讨含有CD59特异位点的短肽封条对T细胞的封闭作用及其可能机制。方法建立HeLa肿瘤小鼠模型，眼球取血分离血清测定补体C3、C4，分离培养鼠胸腺T淋巴细胞、分别加入CD59mAb、CD59特异位点短肽封条作用48h后,MTT法检测T细胞增殖情况。结果肿瘤小鼠补体C3、C4含量明显降低（t=30.970、16.789,P0.01）；CD59mAb对T细胞增殖起促进作用，而含有CD59特异位点的短肽封条能抑制T细胞增殖，两者的作用与正常对照相比差异有显著性（t=5.428、4.726，P0.01）。结论C

2、D59参与T细胞信号转导而与补体抑制作用无关，含有CD59特异位点的短肽封条对T细胞起封闭作用。【关键词】抗原,CD59；短肽封条；肿瘤；T淋巴细胞；细胞增殖CD59是小分子的高度糖基化的GPI锚固蛋白,广泛分布于造血细胞、非造血细胞及多种组织细胞表面，其主要功能是调节补体活化.freela公司）。1.2动物选择与分组取BALB/C纯系小鼠32只,雌雄各半,3～4周龄，体质量18～22g。随机分为2组：Ⅰ组每只小鼠腋窝皮下注射生理盐水0.2mL；Ⅱ组每只小鼠腋窝皮下注射108/L的HeLa细胞0.2mL。每天观察记录，于第20天处死小鼠5。1.3细胞制备无菌分离

3、Ⅰ组、Ⅱ组小鼠胸腺，制备单细胞悬液，淋巴细胞分层液分离获取单个核细胞，再经尼龙毛柱处理获取T淋巴细胞，锥虫蓝染色细胞活率95%以上。调整细胞浓度为4×108/L，加入含体积分数0.10的FCS、青链霉素双抗的RPMI1640培养液10mL，放入37℃含体积分数0.05的CO2温箱中培养。1.4补体C3、C4的测定自小鼠心脏取血，置37℃水浴30min，然后以2000r/min离心10min，在美国德灵公司BNP全自动特种蛋白分析仪上检测。1.5四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检测淋巴细胞的增殖情况1.5.1不同浓度CD59mAb、sp对小鼠T细胞增殖

4、影响设定空白对照组、ConA对照组、ConA+CD59mAb（1、2、4mg/L）组、ConA+含有CD59特异位点的sp（12.5、25.0、50.0mg/L）组，每组各设3个复孔。取前期准备的正常小鼠T淋巴细胞，调整细胞浓度为4×108/L，加入96孔板中，每孔为100μL，按上述分组加入相应试剂,每孔50μL。放入37℃含体积分数0.05的CO2温箱中孵育48h，然后每孔加入MTT10μL，振荡混匀，放入37℃含体积分数0.05的CO2温箱中孵育4h。而后加入100g/LSDS0.02mol/LHCl,每孔100μL，充分吹打混匀20min至完全溶解。

5、全自动酶标检测仪测570nm波长处吸光度（A）值。1.5.2CD59mAb、sp对不同实验组小鼠T细胞增殖的影响调整Ⅰ组、Ⅱ组的T淋巴细胞浓度为4×108/L，加入96孔板中，每孔100μL。设定空白对照组、ConA对照组、ConA+CD59mAb（2mg/L）组、ConA+含有CD59特异位点的sp（25mg/L）组，每组各设8个复孔，每孔加试剂50μL。放入含体积分数0.05CO2的37℃温箱中孵育48h。加MTT，每孔10μL，振荡混匀，放入含体积分数0.05CO2的37℃温箱中孵育4h。加入100g/LSDS0.02mol/LHCl，每孔为100μ

6、L，充分吹打混匀20min至完全溶解。酶标检测仪测570nm波长处A值。以各样本测定孔A(AS)值减对照孔A(AC)值,求得A差值（△A）,分别计算增殖率、抑制增殖率：增殖率=△A/AC×100%；抑制增殖率=

7、△A

8、/AC×100%。重复3次取平均值。1.6统计学处理采用SPSS10.0和PPMS1.56软件进行统计处理，数据均以±s表示，两样本比较采用t检验。2结果2.1小鼠瘤质量及成瘤率小鼠的成瘤率为66.7%,瘤体直径为（4.31±0.10）mm,瘤质量为(1.089±0.056)g。2.2补体C3、C4含量测定Ⅰ组小鼠的补体C3、C4的含量分别为（0.

9、951±0.020）、（0.401±0.027）g/L，Ⅱ组小鼠则分别为（0.465±0.032）、（0.152±0.024）g/L，Ⅱ组较Ⅰ组明显降低(n=6，t=30.970、16.789,.freelAb、sp对正常组T细胞体外增殖的影响经48h培养后显示，CD59mAb对T细胞增殖有明显促进效应，且随着浓度的升高，T细胞增殖明显（图1）。相反，含有CD59特异位点的sp对T细胞的增殖有明显抑制效应，随着浓度的升高，T细胞增殖明显被抑制（图2）。图1CD59mAb对正常组T细胞体外增殖的影响（n=3）（略）图2sp对正常组T细胞体外增殖的影响（n=3）

10、（略）2.3.2CD59