cd59特异位点短肽封条对t细胞封闭作用　

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1、CD59特异位点短肽封条对T细胞封闭作用59特异位点的短肽封条能抑制T细胞增殖，两者的作用与正常对照相比差异有显著性（t=、，PT细胞信号转导而与补体抑制作用无关，含有CD59特异位点的短肽封条对T细胞起封闭作用。【关键词】抗原，CD59;短肽封条；肿瘤；T淋巴细胞;细胞增殖CD59是小分子的高度糖基化的GPI锚固蛋白，广泛分布于造血细胞、非造血细胞及多种组织细胞表面，其主要功能是调节补体活化，通过与补体攻膜复合物（MAC）装配过程中的C8和（或）C9结合从而抑制补体的活化［1］。除了己被广泛认知的调节补体作用外，还具有细胞信号传导的功能［2］。有研宄显示，肿瘤病人机体处于免疫失平衡状态，

2、且这种失平衡与T细胞信号传导缺陷相关［3］。在肿瘤病人机体中，T细胞表达的CD59在细胞信号传导过程中发挥何种作用及对T细胞活性产生何种影响，在国内外文献中尚未见报道。本文通过建立小鼠肿瘤模型，研究荷瘤机体中CD59对T细胞活性的影响，并将本室研制的利用噬菌体肽库筛选技术体外合成的针对CD59活性位点的短肽封条（sp）［4］应用于T细胞，观察其对T细胞的封闭作用并探讨其可能机制。1材料与方法试剂HeLa细胞由本室保存，含有CD59特异位点的短肽封条系本室自制。RPMI1640培养液（Gibco公司），标准胎牛血清（FCS），淋巴细胞分离液（天津市灏洋生物制品科技有限公司），MTT（中国医学

3、科学院血液研究所），Hepes（Solarbio公司），ConA（Sigma公司）。动物选择与分组取BALB/C纯系小鼠32只，雌雄各半，3〜4周龄，体质量18〜22g。随机分为2组：I组每只小鼠腋窝皮下注射生理盐水；II组每只小鼠腋窝皮下注射108/L的HeLa细胞。每天观察记录，于第20天处死小鼠［5］。细胞制备无菌分离I组、II组小鼠胸腺，制备单细胞悬液，淋巴细胞分层液分离获取单个核细胞，再经尼龙毛柱处理获取T淋巴细胞，锥虫蓝染色细胞活率95%以上。调整细胞浓度为4X108/L,加入含体积分数的FCS、青链霉素双抗的RPMI1640培养液10mL，放入37°C含体积分数的C02温箱中

4、培养。补体C3、C4的测定自小鼠心脏取血，置37°C水浴30min，然后以200Or/min离心10min，在美国德灵公司BN?P全自动特种蛋白分析仪上检测。四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检测淋巴细胞的增殖情况不同浓度CD59?mAb、sp对小鼠T细胞增殖影响设定空白对照组、ConA对照组、ConA+CD59?mAb(1、2、4mg/L)组、ConA+含有CD59特异位点的sp(、、/L)组，每组各设3个复孔。取前期准备的正常小鼠T淋巴细胞，调整细胞浓度为4X108/L,加入96孔板中，每孔为100uL，按上述分组加入相应试剂，每孔50uL。放入37°C含体积分数的C02温箱中孵

5、育48h，然后每孔加入MTT10uL，振荡混匀，放入37°C含体积分数的C02温箱中孵育4h。而后加入1OOg/LSDS?/LHCl，每孔100PL，充分吹打混匀20min至完全溶解。全自动酶标检测仪测570nm波长处吸光度(A)值。？mAb、sp对不同实验组小鼠T细胞增殖的影响调整I组、II组的T淋巴细胞浓度为4X108/L,加入96孔板中，每孔lOOuL。设定空白对照组、ConA对照组、ConA+CD59?mAb(2mg/L)组、ConA+含有CD59特异位点的sp(25mg/L)组，每组各设8个复孔，每孔加试剂50uL。放入含体积分数的37°C温箱中孵育48h。加MTT，每孔IOpL

6、，振荡混匀，放入含体积分数的37°C温箱中孵育4h。加入100g/LSDS?/LHCl,每孔为100uL,充分吹打混匀20min至完全溶解。酶标检测仪测570nm波长处A值。以各样本测定孔A（AS）值减对照孔A（AC）值，求得A差值（AA），分别计算增殖率、抑制增殖率：增殖率=AA/ACX100%;抑制增殖率=

7、八八

8、/八0父100%。重复3次取平均值。统计学处理采用和［6］软件进行统计处理，数据均以土s表示，两样本比较采用t检验。2结果小鼠瘤质量及成瘤率小鼠的成瘤率为%，瘤体直径为（±）mm，瘤质量为（土）g。补体C3、C4含量测定I组小鼠的补体C3、C4的含量分别为（土）、（士）g/L

9、,II组小鼠则分别为（土）、（土）g/L,II组较I组明显降低（n=6,法检测T细胞体外增殖情况?mAb、sp对正常组T细胞体外增殖的影响经48h培养后显示，CD59?mAb对T细胞增殖有明显促进效应，且随着浓度的升高，T细胞增殖明显（图1）。相反，含有CD59特异位点的sp对T细胞的增殖有明显抑制效应，随着浓度的升高，T细胞增殖明显被抑制（图2）。图1CD59?mAb对正常组T细胞体外增殖的影响（n=3）（略）图2sp