胸腺肽类药物对体外诱导es细胞分化为t细胞的作用论文

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1、胸腺肽类药物对体外诱导ES细胞分化为T细胞的作用论文彭延文，徐霖，张秀明，张嘉晴，李树浓，项鹏【摘要】【目的】研究目前临床常用的增强细胞免疫功能的胸腺肽，胸腺5肽和胸腺素α-1在小鼠胚胎干细胞向T淋巴细胞分化过程中的作用。【方法】借助小鼠胚胎干细胞(ESC)体外自然分化形成的类胚体（EB）中含有三胚层细胞的独特细胞环境，加入多种细胞因子和胸腺多肽.freelicpolypeptidesincludingthymopentin-5(TP5),thymosin-alpha1(Tα-1)andthymopeptidesonthethymopoiesisofmou

2、seembryonicstem(ES)cellsinvitro.【Method】EBsspontaneouslydifferentiatedEScellsandphocytesinvitrobyutilizingthreedifferentinducingmedia,opeptides,respectively.ThentheexpressionofCD3onthesedifferentiatedcellsetryatdifferenttimepoints.Atthecorrespondingtime-point,thetranscriptionlevel

3、sofNotchsignalmoleculesscontainingeitherTα-1orthymopeptidespromotedtheemergenceofCD3+cellsduringtheobservationperiod,andthepercentageofCD3+cellsincreasedcontainingTP5throughouttheinducingperiod.AndNotch1receptoranditsligands,involvingDelta-like-1andDelta-like-4,expressedininducing

4、systemscontainingeitherTα-1orthymopeptides.HocontainingTP-5duringtheobservationperiod.【Conclusion】Tα-1andthymopeptidesmayplayaroleinpromotingTcellsdifferentiationfromEScellsbyNotch1signalpathaynot.Keybryonicstem(ES)cells;Tcells;thymopentin-5(TP5);thymosinα-1(Tα1);thymopeptides参与特异

5、性免疫应答的T淋巴细胞来源于骨髓多能造血干细胞，经过一系列高度重组和复杂的过程分化成为成熟细胞。这一过程除了需要胸腺基质细胞的辅助外，包括多种胸腺多肽分子和细胞因子在内的胸腺体液微环境也发挥至关重要的作用1。胸腺基质细胞和胸腺多肽都通过影响多种信号途发挥作用，近年来的研究结果显示，其中最重要的是Notch信号途径。胚胎干细胞(embryonicstemcells，ESC)又称多能干细胞，是由受孕3～5d的囊胚内细胞团经体外抑制分化培养所得的一种高度未分化细胞，在适宜的条件下，可诱导分化为多种成体细胞。因此，可以通过ES细胞建立体外分化模型，研究不同基因或细

6、胞因子对不同类型细胞或组织分化的作用2，3。本课题借助ES细胞自然分化形成的EB中含有三胚层细胞的独特细胞环境，研究胸腺肽(thymopeptides)、胸腺素α1(thymosin-α1,.freelopentin-5,TP5)三种胸腺多肽对T细胞发育的作用。同时通过提取不同诱导时期的RNA，利用特异性引物及RT-PCR技术，结合细胞的表型特点，分析这三种胸腺多肽是否通过Notch信号途径影响ES细胞向T淋巴细胞分化。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞系小鼠胚胎干细胞E14.1：建株自129sv(H-2b)雄性小鼠胚胎,由中山大学附属第二医院儿科黄绍良

7、教授赠送。1.1.2主要试剂高糖DMEM培养液、胎牛血清、青霉素钠、链霉素为美国GibcoBRL公司产品。白血病抑制因子(LIF)：Chemicon公司小鼠干细胞因子(Stemcellfactor,SCF)、小鼠白细胞介素-3(Interleukin-3,IL-3)、小鼠白细胞介素-7(Interleukin-6,IL-7)、小鼠Flt-3配体(Flt-3ligand,Flt-3L)为美国Perprotech公司产品。注射用胸腺肽为北京赛生药业有限公司产品，日达仙胸腺素?琢1为Sciclone公司产品，胸腺5肽为海南中和药业有限公司产品。大鼠抗小鼠CD3e

8、-Cy5荧光标记抗体，大鼠抗小鼠CD3e-Cy5荧光标记抗体为eB