压力与牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨

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1、压力与牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨【摘要】　　目的研究持续静压力和人牙周膜细胞对体外诱导脐血单核细胞分化为破骨样细胞的影响，初步探讨静压力和牙周膜细胞在正畸性骨改建中的作用机制。方法密度梯度离心法分离脐血，收集单个核细胞。用组织块酶消化法培养获得牙周膜细胞。建立transanperiodontalligamentcells(HPDLCs)onthedifferentiationofosteoclastlikecells(OLC)inducedfromumbilicalcordbloodcellsinvitro,

2、andtoinvestigatetheroleofcontinuouslypressivepressureandhumanperiodontalligamentcellsinalveolarbonerebuildingduringorthordontictoothmovement.MethodsMononuclearedcellsofumbilicalcordblood(HCMNCs)humanperiodontalligamentbyexplantingenzymaticdigestionodel.GroupB:onlyHC

3、MNCseCCPasGroupA.GroupsAandBicroscope,anditsidentificationedbyhistochemicalanalysisoftartraterresistantacidphosphatase(TRAP).Thecapacityofboneresorptionofthecellingabilityonboneslice.ResultsHCMNCsinGroupAbegantofuseonthe2ndday,Morepositivemultinucleatedcellscould

4、beseenationonthe3rdday.Onlyafeultinucleatedcellsformedintheothergroups,ation.ConclusionHCMNCscanfuseintomultinucleatedOLCunderCCPononuclearedcellofumbilicalcordblood;humanperiodontalligamentcell;continuouslypressivepressure;osteoclastlikecell　　正畸牙移动是一个复杂的机械生物学反应过程，

5、牙周组织感应力学刺激后所发生的组织改建是牙齿移动的基础。破骨细胞(osteoclast,OC)是骨吸收的最重要的功能细胞，于血液中的单核巨噬细胞系[1]。它通过分泌酸和蛋白酶，溶解骨矿，降解胶原，从而启动骨吸收。FUJIKAEM培养基(Gibco公司)；胎牛血清(浙江金华生物制剂公司)；人淋巴细胞分离液(天津灏洋公司)；萘酚ASBI磷酸盐(Sigma)；Hanks平衡盐溶液(实验室配制)，Ⅰ型胶原酶(Sigma)。主要仪器有：全自动高压灭菌锅HV50(HIRAYAMA)；低温高速离心机(3K18)(Sigma)；倒置显微

6、镜(Nikon)；CO2培养箱(BB16)(Heraeus)；超净工作台(BCM100A)(中国苏州)；空气静压力细胞加载系统(自制)。　　1.2玻片及骨磨片的处理　　将1.0cm×1.0cm大小的盖玻片超声清洗后浸入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡过夜后，将盖玻片清洗干净，高压灭菌后备用。取新鲜牛股骨干密质部分，制备成0.5cm×0.5cm厚50～100μm的骨片，超声清洗3次，每次10min。蒸馏水冲洗干净，浸入含10倍双抗的Hanks溶液中存放于-20℃备用。　　1.3HCMNC的分离培养　　取健康产妇抗凝脐血50mL，用等体

7、积培养液稀释并混匀；将稀释血液以体积比1∶1沿管壁轻轻加于淋巴细胞分离液的液面上，形成清晰的分离界面；2000r/min离心20min，轻轻吸取呈云雾状的白膜层(主要含单个核细胞)，收集于离心管内；用Hanks液洗3次，1500r/min离心5min，弃上清，用αMEM培养液(含FBS150mL/L)重悬计数，调整细胞浓度为3×106/mL，接种于预置骨片和盖玻片的transL/LCO2培养箱内培养2h后全量换液。以后每3d半量换液。　　1.4HPDLCs的培养与鉴定　　取西安交通大学口腔医院口外门诊12～18岁健康青少年因

8、正畸拔除的第一前磨牙，刮取牙根中1/3的牙周膜组织后剪碎，1200r/min离心5min，弃上清，加入2g/L的I型胶原酶1～2mL，吹打混匀，置于37℃恒温箱中消化30min，每隔5min振荡摇匀一次。当肉眼观察到液体浑浊，组织块明显变小时加入含FBS150mL/L的DME