脐血cd34+细胞体外定向诱导分化为t淋巴细胞的实验研究①

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1、+姚志娟等　脐血CD34细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的实验研究　第12期·841··移植免疫学·+①脐血CD34细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的实验研究姚志娟　乌仁娜　毕东杰　楼　晓　黄云中　冯　凯　陈　虎(军事医学科学院附属医院移植科中国人民解放军造血干细胞移植中心,北京100039)　　中国图书分类号　R392111　　文献标识码　A　　文章编号　10002484X(2003)1220841205[摘　要]　目的:建立利用人造血干P祖细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的方法,为研究T细胞生物学特性及细胞免+疫提供技术平台。方法:MACS方法分离人脐带CD34细胞接

2、种到人胎儿胸腺基质单层细胞上,IMDM液体培养基含20%人AB血清并加入FL、IL212、IL27和IL22细胞因子组合,于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞利用流式细胞仪对细胞表型进+++行检测,并进行细胞形态学分析。结果:2周后,CD4CD8非成熟T淋巴细胞占细胞总数的013%～1313%,4～5周CD4+++++-+CD8T淋巴细胞达到高峰占1616%～2615%,且CD3CD4CD8和CD3CD4CD8T淋巴细胞逐渐增多,6周后达2615%～6419%和1116%～3819%。培养成熟的T淋巴细胞经PHA+IL22刺激后瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细

3、胞存在。结论:利用+人脐血CD34在体外人胎儿胸腺基质单层细胞上加FL、IL212、IL27和IL22细胞因子组合条件下,可诱导分化出T淋巴细胞,并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应。+[关键词]CD34细胞;胸腺基质细胞;诱导分化;T淋巴细胞+ThestudiesonthecommitteddifferentiationofhumanumbilicalcordbloodCD34cellsintolymphocytesexvivoYAOZhi2Juan,WURen2Na,BIDong2Jieetal.AffiliatedHospitalofMilitaryMedic

4、ineScienceInstitute,HematopoieticStemCellTransplantationCenter,Beijing100039,China[Abstract]Objective:ToestablishthetechniqueforTlymphocytesinductedanddifferentiatedbyusinghumanhematopoieticstemPpro2genitorcellsexvivoandtoprovideatechnologicalplatformforstudyingTcellsbiologicalcharacteris

5、ticsandcellularimmune.Methods:Human+CD342positivecellswereisolatedfromumbilicalcordbloodbyusingahigh2gradientmagneticcellsortingsystem(MACS)andCD34cellswereseededonhumanfetalthymicstromalmonolayersystem.Liquidculturesystemcontainshematopoieticcytokines(FL+IL212+IL27+IL22)and20%humanABseru

6、m.Non2adhensioncellswereobtainedafter7、14、28、35、42daysofculturerespectivelytoanalysisTcellspheno2++typebyFACSusingTcellsspecificmonoclonalantibody.Tcellsmorphologywerealsostudied.Results:After2weeksofcultureCD4CD8-++immatureTlymphocyteswreabout013%～1313%andthepeakvalueis1616%～2615%at4～5we

7、eksofculture.CD4CD8andCD4-CD8TcellsthatcoexpressedCD3cellsincreasedat2615%～6419%and1116%～3819%after6weeksofculture.WrightstainingshowsthatthematureTcellsharvestedaftermitogenicstimulationhavethepresenceoflargecellswithlymphoblastmorphology.Conclusion:Human+umbilical