胸腺肽类药物对体外诱导es细胞分化为t细胞的作用

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1、胸腺肽类药物对体外诱导ES细胞分化为T细胞的作用彭延文，徐霖，张秀明，张嘉晴，李树浓，项鹏【摘要】【目的】研究目前临床常用的增强细胞免疫功能的胸腺肽，胸腺5肽和胸腺素α-1在小鼠胚胎干细胞向T淋巴细胞分化过程中的作用。【方法】借助小鼠胚胎干细胞(ESC)体外自然分化形成的类胚体（EB）中含有三胚层细胞的独特细胞环境，加入多种细胞因子和胸腺多肽，体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化。利用流式细胞仪检测在三种不同胸腺多肽的诱导下，不同时间点的小鼠ESC来源的细胞表面CD3分子的表达水平。并在相应时间点通过RT-PCR检测与T淋

2、巴细胞发育密切相关的Notch信号分子的转录水平。【结果】在加入胸腺肽和胸腺素α1诱导的实验组，均有细胞表达CD3分子，CD3+细胞的百分比随诱导时间的增加而增多；而加入胸腺五肽的实验组无CD3+细胞出现。加入胸腺素α1和胸腺肽的实验组，有Notch1及其配体delta-like-1和delta-like-4的转录；而加入胸腺五肽的实验组的细胞无Notch1及其配体转录。【结论】胸腺素α1或胸腺肽可能通过影响Notch1信号途径支持ES细胞向T细胞分化，而胸腺五肽无此作用。【关键词】胚胎干细胞；T淋巴细胞；胸腺5肽；胸腺

3、素α1；胸腺肽Abstract：【Objective】Toparetheeffectsofthreethymicpolypeptidesincludingthymopentin-5(TP5),thymosin-alpha1(Tα-1)andthymopeptidesonthethymopoiesisofmouseembryonicstem(ES)cellsinvitro.【Method】EBsspontaneouslydifferentiatedEScellsandphocytesinvitrobyutilizingth

4、reedifferentinducingmedia,opeptides,respectively.ThentheexpressionofCD3onthesedifferentiatedcellsetryatdifferenttimepoints.Atthecorrespondingtime-point,thetranscriptionlevelsofNotchsignalmoleculesscontainingeitherTα-1orthymopeptidespromotedtheemergenceofCD3+cells

5、duringtheobservationperiod,andthepercentageofCD3+cellsincreasedcontainingTP5throughouttheinducingperiod.AndNotch1receptoranditsligands,involvingDelta-like-1andDelta-like-4,expressedininducingsystemscontainingeitherTα-1orthymopeptides.HocontainingTP-5duringtheobse

6、rvationperiod.【Conclusion】Tα-1andthymopeptidesmayplayaroleinpromotingTcellsdifferentiationfromEScellsbyNotch1signalpathaynot.Keybryonicstem(ES)cells;Tcells;thymopentin-5(TP5);thymosinα-1(Tα1);thymopeptides参与特异性免疫应答的T淋巴细胞来源于骨髓多能造血干细胞，经过一系列高度重组和复杂的过程分化成为成熟细胞。这一过程除了

7、需要胸腺基质细胞的辅助外，包括多种胸腺多肽分子和细胞因子在内的胸腺体液微环境也发挥至关重要的作用[1]。胸腺基质细胞和胸腺多肽都通过影响多种信号途发挥作用，近年来的研究结果显示，其中最重要的是Notch信号途径。胚胎干细胞(embryonicstemcells，ESC)又称多能干细胞，是由受孕3～5d的囊胚内细胞团经体外抑制分化培养所得的一种高度未分化细胞，在适宜的条件下，可诱导分化为多种成体细胞。因此，可以通过ES细胞建立体外分化模型，研究不同基因或细胞因子对不同类型细胞或组织分化的作用[2，3]。本课题借助ES细胞自

8、然分化形成的EB中含有三胚层细胞的独特细胞环境，研究胸腺肽(thymopeptides)、胸腺素α1(thymosin-α1,Tα-1)和胸腺五肽(thymopentin-5,TP5)三种胸腺多肽对T细胞发育的作用。同时通过提取不同诱导时期的RNA，利用特异性引物及RT-PCR技术，结合细胞的表型特点，分析这三种胸腺