herceptin下调her2表达后对pi3k-akt通路蛋白表达的影响

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1、Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响【摘要】目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响，探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3，免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达，ethods:TheHER2overexpressedbreastcancercelllineSKBR-3munocytochemistry,andtheexpressionso

2、fp-AktandBadountofp-AktproteinofHerceptintreatedgroupdecreasedsignificantlyto53.5%(P<0.01),theamountofBadproteinofHerceptintreatedgroupincreasedsignificantlyby0.83fold(P<0.01).Theratesofp21Cip1和p27Kip1positivecellsofHerceptintreatedgroup（67%and56.1%respectively）p

3、aredtotheuntreatedgroup（19%and21.4%respectively）increasedsignificantly(P<0.01).Conclusion:HerceptincandoproteinBad,p21Cip1andp27Kip1,thustoinhibittheproliferationandpromotetheapoptosisoftumorcells.KeyoForma3111）中培养。依SKBR-3细胞Herceptin（Genentech）MTT试验，IC50为1μg/ml处理48h

4、。本研究采用1μg/mlHerceptin处理48h来下调HER2的表达为处理组，未作任何处理为对照组。1.2HER2、p21Cip1和p27Kip1表达的检测经多聚甲醛固定的培养细胞的爬片（检测HER2和p21Cip1）和经乙醇固定的培养细胞的石蜡包埋切片[3]（检测p27Kip1），采用免疫组化S-P试剂盒（福州迈新），DAB显色，苏木素复染。HER2阳性表达（棕色）位于细胞膜和（或）细胞浆，p21Cip1和p27Kip1的阳性表达（棕色）分别位于细胞浆和细胞核。高倍镜下随机选取几个视野观察1000个细胞，得出阳性细胞百分率并拍

5、照。1.3arker。实验重复3次以上，内参采用β-actin，Gel-ProAnalyzer4.0软件分析蛋白条带积分吸光度（IA）值。1.4统计学处理方法两组率的比较采用x2检验，两组均数比较采用t检验。2结果2.1Herceptin处理SKBR-3细胞对HER2表达的下调对照组（见图1a）HER2阳性细胞率为78.3%，处理组（见图1b）HER2阳性细胞率为37.4%，二者差异有显著性（P<0.01）。2.2HER2表达的下调对p21Cip1和p27Kip1蛋白表达的影响抗p21Cip1和抗p27Kip1免疫组化结果：对

6、照组（见图2a和图3a）p21Cip1和p27Kip1阳性细胞率分别为19.1%和21.4%，明显低于处理组（见图2b和图3b）（分别为67.3%和56.1%），二者差异有显著性（P<0.01）。2.3HER2表达的下调对p-Akt和Bad蛋白表达的影响Westernblot结果（见图4）显示：用β-actin作为内参校正后，处理组较对照组p-Akt蛋白含量降低53.5%[(2.06±0.06)vs(4.43±0.39)，t=10.3，P<0.01]，Bad蛋白含量升高0.83倍[(0.75±0.03)vs(0.41±0

7、.02)，t=17.2，P<0.01]。3讨论本研究显示，处理组较对照组HER2阳性细胞率下降，证实Herceptin能特异性地作用于HER2过表达的细胞，下调HER2的表达。真核生物对生长因子等刺激产生应答，激活细胞内不同信号传导通路，其中PI3K/Akt是与细胞增殖和细胞凋亡关系最密切的信号传导通路之一[4]。IA型PI3K是酪氨酸激酶受体（如HER2）传递信号的重要转导子[5]。细胞膜HER2受生长因子等刺激后，细胞内PI3K（磷脂酰肌醇-3羟基激酶）活化，进而磷酸化其底物PIP2使其转化为PIP3[6]。Akt（蛋白激

8、酶B，PKB）和PIP3结合，前者的Thr308和Ser474位点因磷酸化而被激活[7]，活化的Akt可能进一步激活其下游分子mTOR[8]等。Zhou等[9]研究发现，Akt的磷酸化水平从正常乳腺上皮组织、不典型增生到恶性转化，再到