sfrp3表达下调对小鼠牙齿发育的影响

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1、福建师范大学硕士学位论文sfrp3表达下调对小鼠牙齿发育的影响姓名：林燕燕申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：张彦定20060401摘要器官发育的形态发生过程中，Wnt家族信号是调节上皮和间充质之间相互作用的重要生长因子之一，在果蝇(Drosophila)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans)的巡化，学删究．恻，H蜘蜍(Xenopus)的H1化圳期表达研究和小鼠的基因敲除实验中都证明了Wnt家族与胚胎的分节，中枢神经系统的图示形成(CNSpatterning)和细胞不对称分化的调控有关。wnt信号系统也是调节牙齿发育的四大类生

2、长因子之一．sFRP(secfetedFizzled．relatedprotein)是Wnt信号的调控因子，本论文通过抑制sfrp3的表达，研究Wnt信号在牙齿发育过程中所起的作用。利用RNAi技术和慢病毒转基因技术，设计针对sfrp3的siRNA，构建表达shRNA的pNL-EGFP—U6一shsfrp3-I和口NL—EGFP，U6．shsfrp3．II质粒，使它们分别和pVSVG,pHelper组成慢病毒三质粒转染系统，再共转染293T细胞，生产EGFP-shsfrp3一I病毒和EGFP—s№^p3-II病毒。用EGFP．sh@p3．I病毒和EGFP。

3、shsfrp3。II病毒分别感染牙间充质细胞，通过ReaRimeRT-PCR方法检测各个组织的sfrp3的相对表达量，筛选出抑制效率为63％的EGFP．shsfrp3一II病毒应用于研究牙齿发育。实验结果是：感染EGFP-stuJ}p3-11病毒的重组牙J垤(El3．5牙叫充质+EIO．5牙上皮)的成牙率降低。感染EGFP-shsfrp3-II病毒的E11．5整牙的早期发育过程会被促进。这些结果都证明了wm家族信号系统在牙齿早期发育中具有重要的作用。关键词got、sfrp3、RNAL、RealtimeRT—PCR、转基因技术、慢病毒载体系统、牙齿发育Abs

4、tractWritextracellularsignalingmoleculeshaveessentialrolesinepithelial-mesenchymalinteractionsinvolvedintissuemorphogenesis．GeneticstudiesinDrosophilaand’Caenorhabditiselegans,ectopicgeneexpressioninXenopus，andgeneknockoutsinthemousehavedemonstratedtheinvolvememofWnrainprocessesas

5、diverseassegmentation,CNSpatterning,andcontrolofasymmetriccelldivisions．Wntssigrlalisoneofthefourgrowthfactorsthatregulatethetoothdevelopmemt．SFRPs(secretedFizzled—relatedproteins)arereceptorsthatdirectlybindtoWnts．Inthisresearch，weinvestigatetheeffectsofWntssignalontoothdevelopme

6、nt，andwefocusonthesfrp3whichisoneofthesp,familymembers．WeuseRNAiandlentiviraigenetransfertechniquetoknockdowntheexpressionofsfrp3intoothmcscnchyme．PlasmidsofpNL-EGFP-U6-sh茸—，p了-Iand11whichexpressedshRNAwereconstructedandcombinedwithpVSVGandpHelper,respcectively,tOconstituteLentivi

7、ralvectorsystemofthreeplasmids．TheLentiviralvectorsystemWaStramfeetedinto293TcelltoproduceEGFP-shsfrp3-IandEC求p-shsfrp3一IIlentivirus．ToothmesenchymalcellsweTeinfectedbybothlentivirusesandidentifiedbyReahimeRT-PCRtoexamineinhibitoryefficency．nlcEGFP·s叼印孓IIlentivirnswhichCaninhibit6

8、3％oftheexpressionofsfrp3Wasselect